ACAC通过TLR2/4-NF-κB信号通路诱导奶牛中性粒细胞免疫机能低下的作用研究

奶牛酮病论文 ACAC论文 PMN论文 TLR2/4-NF-κB论文
论文详情
致谢第4-5页
摘要第5-7页
Abstract第7-9页
缩写和符号清单第13-15页
文献综述第15-25页
引言第25-26页
1 材料与方法第26-39页
    1.1 试验动物第26-28页
    1.2 实验材料与仪器设备第28-30页
    1.3 溶液配制第30页
    1.4 血液采集与处理第30页
    1.5 奶牛PMN的分离与培养第30页
    1.6 快速姬姆萨染色第30-31页
    1.7 试验分组及处理第31页
    1.8 最佳添加浓度和时间的确定第31页
    1.9 IKKβ激酶活性检测第31页
    1.10 ELISA法检测氧化抗氧化指标、炎性因子浓度变化第31页
    1.11 westernblot法测定TLR2、TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白表达第31-33页
        1.11.1 细胞蛋白的提取第31页
        1.11.2 细胞蛋白的浓度检测第31-32页
        1.11.3 SDS-PAGE凝胶电泳第32-33页
    1.12 qRT-PCR法测定TLR2/4-NF-κB信号通路关键因子mRNA的相对表达量第33-34页
        1.12.1 RNA提取第33页
        1.12.2 反转录第33页
        1.12.3 qRT-PCR扩增第33页
        1.12.4 引物设计合成第33-34页
    1.13 EMSA法检测NF-κBp65蛋白入核表达第34-37页
        1.13.1 核蛋白制备第34-35页
        1.13.2 蛋白定量第35页
        1.13.3 凝胶的配制第35-36页
        1.13.4 EMSA结合反应第36页
        1.13.5 电泳分析第36页
        1.13.6 电转膜第36页
        1.13.7 紫外交联第36页
        1.13.8 化学发光法检测生物素标记的探针第36-37页
    1.14 IF检测NF-κBp65的入核表达第37页
    1.15 ROS检测第37页
    1.16 数据处理第37-39页
2 结果与分析第39-56页
    2.1 血清酮病、氧化抗氧化指标及炎性因子的浓度变化第39-42页
        2.1.1 酮病指标浓度变化第39-40页
        2.1.2 氧化抗氧化指标浓度变化第40-41页
        2.1.3 炎性因子的浓度变化第41-42页
    2.2 PMN分离与形态观察第42页
    2.3 ACAC最佳添加浓度和时间的筛选第42-43页
    2.4 IKKβ激酶活性第43-44页
    2.5 ACAC对TLR2/4-NF-κB信号通路相关蛋白及mRNA相对表达量的影响第44-46页
    2.6 NAC对TLR2/4-NF-κB信号通路相关蛋白及mRNA相对表达量的影响第46-48页
    2.7 ACAC对炎性因子蛋白及mRNA相对表达量的影响第48-50页
    2.8 NAC对炎性因子蛋白及mRNA相对表达的影响第50-52页
    2.9 ACAC及NAC对细胞上清中炎性因子浓度变化的影响第52-53页
    2.10 NF-κBp65入核表达第53-55页
        2.10.1 EMSA第53页
        2.10.2 免疫荧光第53-55页
    2.11 ROS检测第55-56页
3 讨论第56-60页
    3.1 酮病奶牛体内的氧化抗氧化状态第56-57页
    3.2 ACAC对TLR2/4-NF-κB信号通路的影响第57页
    3.3 氧化应激对TLR2/4-NF-κB信号通路的影响第57-60页
4 结论第60-61页
参考文献第61-75页
附录第75-80页
作者简介第80-81页
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