利用杂种优势是提高油菜产量、增强抗耐性、缓解产量与品质矛盾的重要途径。隐性细胞核雄性不育具有不育性稳定彻底,恢复源广,无负胞质效应等优点,是一种具有较大应用潜力的授粉控制系统。然而,大部分隐性核不育材料无法完全保持,制种时必须拔除母本行中约50%的可育株。因此,应用隐性核不育系在大面积制种时成本高且风险较大。上世纪90年代,9012AB类型的隐性核不育通过引入临保系产生100%不育群体,为隐性核不育系统的利用开辟了一条新的途径。目前,该系统(或相似系统)已成为我国乃至世界油菜杂种优势利用的重要途径之一。本研究在系统的遗传分析和图谱定位的基础上,修正了9012AB的育性遗传模型。在此基础上,通过比较作图实现了BnRf位点的精细定位,并最终将其定位到一个BAC克隆13.8kb的物理区间内,主要结果如下：1.9012AB类型核不育育性遗传模式的修正。通过对9012AB及其临保系T45与来源不同的几个自交系和常规品种的遗传分析,发现之前被广泛接受的三对基因(Bnms3,Bnms4,Bnrf(?)或Bnesp)控制育性的遗传模式不能合理解释9012A与DH206A杂交后代的育性分离比率。基于这一事实,对9012AB的育性遗传模式进行了修正,即雄性不育只受Bnms3和BnRf两个位点控制,显性BnMs3为野生型可育基因,隐性Bnms3为突变不育基因；而原来假定的BnMs4位点实质上是BnRfa位点的一种复等位基因型BnRfa(恢复型),该位点的另外两种基因型分别为BnRfb(不育型)和BnRfc(可育型),三者的显隐性关系为BnRfa>BbRfb>BnRfc.按照这一遗传模式,9012AB可育株基因型为BnMs3ms3RfbRfb,不育株基因型为Bnms3ms3RfbRfb；临保系基因型为Bnms3ms3RfcRfc,恢复系基因型为BnMs3Ms3或Bn__RraRfa2.BnRf复等位遗传模式的分子标记验证。在来源于(9012A×DH206A)F2中可育株与9012A回交得到的育性分离比为1：1的F2BC1株系中,鉴定出基因型为Bnms3ms3RfaRfb的可育株。在该类型可育株继续与9012A回交得到育性分离比为1：1的群体RG206AB(RG206A,Bnms3ms3RfbRgbRG206B,Bnms3ms3RfaRfb)中,筛选获得了与BnRga等位基因型连锁的13个AFLP标记和5个SSR标记。标记整合发现,5个SSR标记都被定位于A7连锁群且同时与BnRfb基因型连锁,而3个由AFLP转化而成的SCAR标记亦与BnRfb存在连锁关系。在此基础上,利用BnRfb精细定位的标记实现了BnRfa的精细定位,并将BnRfa和BnRfb共定位到标记AT3G24240与AT3G23900之间,对应拟南芥共线性区域约50kb。该结果从分子标记水平上初步证实了Rf位点复等位遗传模式的可靠性,并为该位点物理图谱的整合奠定基础。3.含BnRf位点区域的物理图谱构建。利用BnRfb共分离的分子标记AT3G23870从9012A中扩增的特异序列为探针筛选甘蓝型油菜BAC克隆文库,获得16个阳性克隆。位点两侧最近的共显性标记AT3G23900及AT3G24240对候选克隆的PCR分析表明,BAC克隆JBnB089D05和JBnB134D11最可能包含目标位点。而源于JBnB089D05两侧末端序列开发的标记BES18和BES19进一步被定位到BnRf两侧,证实该克隆包含目标基因。从该BAC克隆上获得了BnRf两侧最近标记AT3G23900与AT3G23910-1之间13.8kb的序列,预测表明其包含3个完整的ORF及2个ORF的部分片段。
