IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ、anti-IGF-IR对人肾上腺皮质癌SW-13细胞株生长及凋亡的调控

研究目的：肾上腺皮质癌是一种罕见且恶性程度极高的恶性肿瘤，其发病率约1／100万，发病机理尚未明确。大约2／3的患者发现肿瘤时已局部侵润或远处转移，临床治疗效果差，预后差。IGFs是近年来肿瘤研究一大热点，与多种肿瘤的发生、发展、进展及预后有密切关系。本研究旨在评价肾上腺皮质癌与IGFs的关系，冀希望通过本研究达到以下目的：1、通过对SW-13细胞株体外培养了解SW-13细胞株的生物学行为及生物学特性；2、通过IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ及anti-IGF-IR对SW-13细胞体外培养的干预，探讨其对SW-13细胞株生长及凋亡的调控。3、探讨以IGFs为新的治疗靶点用于治疗肾上腺皮质癌的可能。材料与方法：1、材料：苏州净化设备厂产SA-ⅡA生物安全台；Napco5410型CO2细胞培养箱；biocell产ht2型酶标仪；尼康E-600光学显微镜；日立H-600透视电镜；HMIAS-2000高清晰度彩色医学图文分析系统；Sigma公司提供L-15培养基干粉、分装噻唑氮蓝（MTT）、分装二甲亚砜（DMSO）、胰蛋白酶；杭州四季青生物制品有限公司提供胎牛血清。SW-13细胞株由上海中科院细胞库提供。R&D公司提供人重组Ⅰ型胰岛素样生长因子（rhIGF-Ⅰ）、人重组Ⅱ型胰岛素样生长因子（rhIGF-Ⅱ）、人胰岛素样生长因子Ⅰ型受体抗体（anti-IGF-IR）；Roche公司提供原位凋亡检测试剂盒。2、SW-13细胞株进行体外培养，MTT法检测其生长曲线，电镜下、光镜下进行细胞形态学观察。3、采用MTT法描绘不同浓度胰岛素样生长因子及其Ⅰ型受体抗体作用后SW-13细胞株体外培养生长的促进及抑制的效应-浓度曲线，并比较不同浓度的胰岛素样生长因子和其Ⅰ型受体抗体组及单一胰岛素样生长因子或其Ⅰ型受体抗体组与阴性对照组之间差异。4、原位凋亡（TUNEL）法检测胰岛素样生长因子及其Ⅰ型受体抗体单独或联合作用于SW-13细胞后细胞凋亡情况，同时观察细胞形态及数量变化。结果：1、细胞需在37℃，无CO2，偏碱性环境下培养，6-8h完全贴壁，2d左右进入对数生长期。细胞生物学性状稳定。2、胰岛素样生长因子能明显促进SW-13细胞增殖，其作用效果与作用浓度在一定浓度范围内呈正相关（P＜0.05）；而胰岛素样生长因子Ⅰ型受体抗体能抑制胰岛素样生长因子对SW-13细胞刺激作用，并且对SW-13细胞的增殖亦有直接抑制作用（P＜0.05）。3、胰岛素样生长因子能明显抑制SW-13细胞凋亡，而胰岛素样生长因子Ⅰ型受体抗体能促进SW-13细胞凋亡，而胰岛素样生长因子主要通过胰岛素样生长因子Ⅰ型受体发挥其抑制SW-13细胞凋亡的生物学作用。结论：1、SW-13细胞株是一种生物学特性稳定、实用的细胞株。2、胰岛素样生长因子可促进SW-13细胞株生长，这种作用主要通过胰岛素样生长因子Ⅰ型受体介导。3、胰岛素样生长因子可促进SW-13细胞株生长，与其抑制细胞凋亡有关。这种生物学作用亦通过胰岛素样生长因子Ⅰ型受体介导，胰岛素样生长因子Ⅰ型受体抗体可明显抑制这种生物学作用。