卵巢癌在妇科恶性肿瘤中死亡率最高,但其病因目前尚不明确。大量流行病学调查证明,卵巢癌的发生与高促性腺激素水平刺激和过度排卵有关。GnRH存在多种亚型,主要调节性腺内受体形成和激素功能,在哺乳动物目前发现的主要是GnRHⅠ和GnRHⅡ。GnRH及其受体高表达于激素依赖性肿瘤,并对其生长发挥重要的调控作用,如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、前列腺癌、肝癌等。有关靶向应用激素相关试剂的研究显示,人工合成GnRH类似物是一种高效低毒的肿瘤杀伤剂,目前已应用于卵巢癌的临床治疗。因此,对GnRH及其受体功能和作用机制的深入研究将为开发卵巢癌靶向治疗药物提供理论依据。本研究通过系统地观察GnRHⅠ及GnRH受体在上皮性卵巢良性和恶性肿瘤组织中的表达差异,揭示了两者与卵巢癌的病理分化级别的关系;并进一步通过观察GnRH类似物对卵巢癌细胞生长的抑制作用,阐明了GnRH激动剂增加化疗效果的机制,为在分子水平靶向治疗卵巢癌提供了实验依据。第一部分GnRHⅠ和GnRH受体在卵巢肿瘤中的表达及意义目的:观察GnRHⅠ和GnRH受体在上皮性卵巢良性和恶性肿瘤组织中的表达差异,揭示两者与卵巢癌病理分化级别的关系。方法:采用免疫组化SP法,检测22例卵巢良性上皮性肿瘤以及39例卵巢癌中GnRHⅠ和GnRH受体的表达。结果:1 GnRHⅠ和GnRH受体的定位及分布:卵巢上皮性肿瘤组织免疫组织化学SP染色特异性良好。卵巢上皮性肿瘤组织中GnRHⅠ阳性产物大多位于细胞浆和细胞膜,胞核内无阳性产物;卵巢上皮性肿瘤组织中GnRH受体阳性产物也大多位于细胞浆和细胞膜,胞核内无阳性产物。2卵巢上皮性肿瘤中GnRHⅠ的表达状况及其与组织分化的关系:卵巢良性上皮性肿瘤GnRHⅠ阳性表达率(54.5%)低于卵巢癌中GnRHⅠ的表达(79.5%),差异有统计学意义(X2=4.21,P<0.05);病理分级中G1级卵巢癌组织GnRHⅠ的阳性率(50%)低于G2级卵巢癌组织GnRHⅠ的阳性率(91.7%),差异有统计学意义(X2=5.04,P<0.05);G3级卵巢癌组织中GnRHⅠ阳性表达率为(93.3%),与G2级卵巢癌组织表达差异无统计学意义(X2=0.03,P>0.05)。3卵巢上皮性肿瘤中GnRH受体的表达状况及其与组织分化的关系:卵巢良性上皮性肿瘤中GnRH受体阳性表达率(81.8%)高于卵巢癌(53.8%),具有统计学意义(X2=4.77,P<0.05);病理分级中G1级卵巢癌组织GnRH受体的阳性率(16.7%)低于G2级卵巢癌组织GnRH受体的阳性率(58.3%),有统计学意义(X2=4.44,P<0.05);G3级卵巢癌组织中GnRH受体阳性表达率为(80.0%),与G2级卵巢癌组织表达差异无统计学意义(X2=1.50,P>0.05)。结论:1 GnRHⅠ及GnRH受体在卵巢良性及恶性上皮性肿瘤组织中均有表达,说明卵巢上皮性肿瘤组织中存在GnRH自/旁分泌调节系统。2 GnRHⅠ及GnRH受体表达与卵巢癌的病理组织学分级有关。随分化级别的增高,GnRH I及GnRH受体的表达水平增高,提示卵巢癌中GnRH I、GnRH受体与卵巢癌增殖、侵袭力及不良预后有关。第二部分GnRH激动剂曲普瑞林对卵巢癌细胞OVCAR3生长的抑制作用目的:观察GnRH激动剂曲普瑞林对卵巢癌细胞生长的抑制作用并探讨诱导细胞凋亡的机制。方法:1选用不同浓度曲普瑞林刺激卵巢癌细胞OVCAR3后,采用MTT方法检测其对细胞的增殖活性的影响。2运用RT-PCR的方法,检测曲普瑞林对卵巢癌细胞OVCAR3中凋亡相关因子Caspase-3的表达的影响。结果:1曲普瑞林对卵巢癌细胞OVCAR3增殖活性的影响:MTT结果显示,10-7mol/l浓度的曲普瑞林作用细胞24h后,其增殖抑制率为(41.07±0.43)%,随着药物浓度的增加(10-6mol/l,10-5mol/l,10-4mol/l,10-3mol/l,10-2mol/l),抑制率逐渐增加,分别为(50.56±0.76)%,(69.86±1.05)%,(65.43±0.87)%,(62.09±1.24)%,(58.69±0.87)%;以10-5mol/l浓度的曲普瑞林抑制率最高,有统计学意义(P<0.05);用10-5mol/l浓度的曲普瑞林作用于细胞24h,48h,72h后,增殖抑制率分别是(69.86±1.08)%,(58.69±0.98)%,(48.56±1.02)%,作用时间在24h时,抑制率最高,有统计学意义(P<0.05)。2曲普瑞林对卵巢癌细胞凋亡相关因子Caspase-3表达的影响①10-4mol/l,10-5mol/l,10-6mol/l浓度的曲普瑞林作用于OVCAR3细胞24h后,Caspase-3的OD值分别是(0.51±0.04),(0.71±0.07),(0.41±0.04),与对照组细胞的OD值(0.33±0.02)相比,Caspase-3于曲普瑞林在10-5mol/l浓度时,表达量最高,有统计学意义(F=42.028,P<0.05);②10-4mol/l,10-5mol/l,10-6mol/l浓度的曲普瑞林作用于OVCAR3细胞48h后,Caspase-3的OD值分别是(0.69±0.07),(1.01±0.08),(0.64±0.08),与对照组细胞的OD值(0.48±0.04)相比,Caspase-3于曲普瑞林在10-5mol/l浓度时,表达量最高,有统计学意义(F=107.595,P<0.05);③10-4mol/l浓度的曲普瑞林作用于OVCAR3细胞24h,48h后,Caspase-3的OD值分别是(0.85±0.09),(0.62±0.06),与对照组细胞的OD值(0.34±0.04)相比,Caspase-3在10-4mol/l浓度的曲普瑞林作用24h时表达量最高,有统计学意义(F=47.164,P<0.05);④10-5mol/l浓度的曲普瑞林作用于OVCAR3细胞24h,48h后,Caspase-3的OD值分别是(0.85±0.09),(0.64±0.05),与对照组细胞的OD值(0.40±0.06)相比,Caspase-3在10-5mol/l浓度的曲普瑞林作用24h时表达量最高,有统计学意义(F=29.647,P<0.05);⑤10-6mol/l浓度的曲普瑞林作用于OVCAR3细胞24h,48h后,Caspase-3的OD值分别是(0.96±0.08),(0.68±0.04),与对照组细胞的OD值(0.58±0.04)相比,Caspase-3在10-4mol/l浓度的曲普瑞林作用24h时表达量最高,有统计学意义(F=48.337,P<0.05)。结论:1曲普瑞林对于GnRH受体阳性的卵巢癌细胞的生长有抑制作用。2曲普瑞林作用于卵巢癌细胞,可诱导细胞发生凋亡,凋亡相关因子Caspase-3的表达量增多。
