SV40 ST使良性永生化前列腺上皮细胞获得TRAIL敏感表型的机制研究

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第一部分良性永生化前列腺上皮细胞LH/LE对TRAIL不同敏感性及其机制研究目的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)可选择性诱导某些肿瘤细胞凋亡,而对绝大多数正常细胞无毒性作用,这一特性使TRAIL在抗肿瘤治疗中具有很好的应用前景。本研究是为了明确良性永生化前列腺上皮细胞LH/LE对TRAIL的不同敏感性及其机制。方法正常前列腺上皮细胞通过导入猿猴空泡病毒40(SV40)大T抗原和端粒酶末端转移酶催化亚单位(hTERT),使其永生化,得到LH细胞;在这基础上又导入SV40小T抗原片段,得到LE细胞。TRAIL作用于这两种细胞后,MTT法检测细胞活力,显微镜下观察细胞形态学改变和流式细胞术检测细胞凋亡状态。Western blot检测PP2A和c-Fos的蛋白表达。TRAIL处理LH和LE细胞后检测PP2A酶活性。SPSS 13.0软件进行统计学分析。结果LH细胞对TRAIL耐受,LE细胞对TRAIL敏感。TRAIL作用后大约45%的LE细胞发生凋亡,而TRAIL作用后的LH细胞发生凋亡的比例很低。Western blot结果显示,PP2A蛋白表达量在LH细胞与LE细胞间未见明显差异,而PP2A的酶活性在LH细胞中明显高于LE; c-Fos蛋白表达在LE细胞中明显高于LH细胞。结论SV40 ST赋予了良性永生化前列腺上皮细胞LE细胞TRAIL敏感性表型。第二部分奥克代酸诱导TRAIL。耐受的良性永生化前列腺上皮细胞LH细胞获得TRAIL敏感表型的研究目的研究奥克代酸(Okadaic acid, OA)诱导TRAIL耐受的LH细胞获得TRAIL敏感性及其机制。方法蛋白磷酸酶2A(PP2A)抑制剂OA处理TRAIL耐受的良性永生化前列腺上皮细胞LH细胞后,TRAIL作用于处理组和对照组,MTT法检测细胞活力,细胞形态学和流式细胞术染色检测细胞凋亡状态。Western blot检测4PP2A和·c-Fos的蛋白表达。酶活性试剂盒检测PP2A酶活性。用SPSS 13.0进行统计学分析。结果显示经OA诱导后的LH细胞对TRAIL敏感,细胞形态学可见大量的细胞发生凋亡,流式细胞检测显示经OA诱导TRAIL作用后的LH细胞有大约32%的细胞发生凋亡,而未经OA诱导TRAIL作用后的LH细胞中,凋亡细胞的比例很低。Western blot结果显示,经OA诱导后LH细胞中PP2A蛋白表达量明显减少,PP2A酶活性明显下降,而c-Fos蛋白表达量经OA诱导后明显增多。结论OA诱导TRAIL耐受的LH细胞获得TRAIL敏感表型。第三部分A-Fos逆转奥克代酸诱导TRAIL耐受的LH细胞向TRAIL敏感转化的研究目的明确c-Fos在良性永生化前列腺上皮细胞对TRAIL敏感性中的作用及其机制。方法A-Fos质粒转染LH细胞,奥克代酸(Okadaic acid, OA)处理后,TRAIL作用于各实验组,MTT法检测细胞活力,细胞形态学和流式细胞术检测细胞凋亡状态。Western blot检测PP2A和c-Fos的蛋白表达。用SPSS 13.0进行统计学分析。结果MTT法检测细胞活力显示,经OA诱导后的LH细胞对TRAIL敏感,转染A-Fos质粒的LH细胞虽然经OA诱导但对TRAIL敏感性下降;流式细胞术显示:未经OA诱导TRAIL作用后的LH细胞中凋亡细胞的比例很低,经OA诱导TRAIL作用后的LH细胞后有大约51%的细胞发生凋亡;而经OA诱导TRAIL作用后,转染A-Fos质粒的LH细胞的细胞凋亡率低于未转染A-Fos质粒的LH细胞;Western blot结果显示,经OA诱导后未转染组和A-Fos转染组中PP2A蛋白表达量明显减少,而c-Fos蛋白表达量增多;且A-Fos转染组中c-Fos蛋白表达量低于未转染组。结论OA诱导TRAIL耐受的LH细胞获得TRAIL敏感表型,其机制可能通过减少PP2A酶表达,抑制PP2A酶活性,增加c-Fos表达等途径发挥作用。而A-Fos可能通过抑制c-Fos表达,从而逆转OA诱导TRAIL耐受的LH细胞向TRAIL敏感转化。c-Fos作为促凋亡因素,是TRAIL诱导凋亡所必须的。
缩略词表第6-7页
中文摘要第7-10页
英文摘要第10-13页
前言第14-18页
第一部分 良性永生化前列腺上皮细胞LH/LE对TRAIL不同敏感性及其机制研究第18-40页
    材料与方法第18-30页
    结果第30-35页
    讨论第35-37页
    参考文献第37-40页
第二部分 奥克代酸诱导TRAIL耐受的良性永生化前列腺上皮细胞LH细胞获得TRAIL敏感表型的研究第40-64页
    材料与方法第40-52页
    结果第52-59页
    讨论第59-61页
    参考文献第61-64页
第三部分 A-Fos逆转奥克代酸诱导TRAIL耐受的LH细胞向TRAIL敏感转化的研究第64-86页
    材料与方法第64-78页
    结果第78-82页
    讨论第82-84页
    参考文献第84-86页
综述一第86-101页
综述二第101-118页
附录 在校期间发表文章第118-119页
致谢第119-120页
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