锌对糖尿病大鼠视网膜病变治疗的研究
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研究背景及目的:目前认为糖尿病性视网膜病变(Diabetic retinopathy,DR)是以氧化应激增多为基础机制的微血管病变(新生血管的发生和发展),但是具体机制尚未阐明。近年的研究发现,糖尿病患者和/或动物体内血清锌普遍降低,体内组织金属硫蛋白(Metallothionein,MT)反应性上调发生在糖尿病诱发组织损伤之后,这种组织损伤将诱导MT表达,同时抑制其病理改变,阻止组织进一步损伤,减缓糖尿病组织损伤的进展速度;锌及MT是重要的抗氧化剂,而且锌是金属硫蛋白的重要诱导剂,通过补锌诱导MT上调,可以有效抑制糖尿病心肌病及糖尿病肾病的氧化损伤已经被证实。本实验通过建立STZ糖尿病大鼠模型,观察补锌治疗后大鼠视网膜组织血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、及金属硫蛋白(MT)免疫组织化学染色积分光密度(Integrated optical density,IOD)及采用透射电镜技术观察大鼠视网膜组织毛细血管超微结构的变化,研究锌、VEGF、MT与氧化应激在糖尿病性视网膜病变中的关系,观察补锌是否能够抑制视网膜组织VEGF的表达及诱导MT的表达上调从而达到抑制DR氧化应激导致的损伤。探讨锌、VEGF、 MT与氧化应激在DR中的关系,为延缓或治疗DR提供新思路。研究内容和方法:(1)STZ糖尿病动物模型的建立。(2)将所有实验动物分为:正常对照组、糖尿病组、正常补锌组、糖尿病补锌组。正常对照组(N):每日生理盐水5mg/kg灌胃;糖尿病组(G):每日生理盐水5mg/kg灌胃;正常补锌组(N+Zn):每日0.1%硫酸锌溶液5mg/kg灌胃;糖尿病补锌组(G+Zn):每日0.1%硫酸锌溶液5mg/kg灌胃。(3)标本的制备:石蜡切片及透射电镜标本制备。(4)视网膜VEGF、MT免疫组织化学染色(PS法),结果判定:以在细胞的胞质、胞浆部位出现棕黄色颗粒者判定为阳性,而细胞核被染为蓝色。(5)JEM-1200EX透射电镜观察视网膜毛细血管超微结构。(6)图像采集,数据整理,进行统计学分析。研究结果:大鼠视网膜免疫组织化学染色结果显示:1、正常对照组、正常补锌组、糖尿病组、糖尿病补锌组各组视网膜组织中VEGF免疫组织化学染色积分光密度(IOD)均值之间比较差异具有显著性(F=10.339,P﹤0.05),糖尿病组明显比正常对照组、正常补锌组、糖尿病补锌组高;正常对照组分别与正常补锌组、糖尿病组、糖尿病补锌组大鼠视网膜VEGF表达IOD值比较:正常对照组与糖尿病组比较差异具有显著性(P<0.05),正常对照组与正常补锌组、糖尿病补锌组比较差异无显著性(P﹥0.05);糖尿病组分别与正常对照组、正常补锌组、糖尿病补锌组大鼠视网膜VEGF表达IOD值比较差异均具有显著性(P<0.05)。2、各组视网膜组织中MT免疫组织化学染色积分光密度(IOD)均值之间比较差异具有显著性(F=6.509,P=0.003﹤0.05),糖尿病补锌组明显高于正常对照组、正常补锌组、糖尿病组;正常对照组与正常补锌组、糖尿病组之间比较差异无显著性(P>0.05),正常对照组与糖尿病补锌组之间比较差异具有显著性(P﹤0.05);糖尿病组与正常对照组、正常补锌组之间比较差异无显著性(P﹥0.05),糖尿病组与糖尿病补锌组之间比较差异具有显著性(P﹤0.05)。大鼠视网膜组织透射电镜观察结果显示:正常对照组、正常补锌组视网膜毛细血管内皮细胞、周细胞各自的核及胞质内各细胞器形态正常;内皮细胞壁彼此呈叠瓦状或指状突起形成紧密连接,他们被周细胞包绕,内皮细胞及周细胞基膜完整,电子密度均匀一致。糖尿病组视网膜毛细血管管壁增厚,管腔狭窄,甚至闭塞,内皮细胞基膜及周细胞基膜增厚,断裂缺失,电子密度不均;内皮细胞核形态变的不规则,异染色质靠边聚集,胞质中线粒体空化,脊断裂,紧密连接被破坏,周细胞胞质线粒体空化,粗面内质网扩张,血管周围的视网膜组织水肿。糖尿病补锌组视网膜毛细血管管壁较糖尿病组变薄,管腔狭窄明显减轻,内皮细胞基膜及周细胞基膜较糖尿病组变薄,内皮细胞及周细胞胞质线粒体正常,或仅存轻度空化。研究结论:(1)糖尿病大鼠视网膜组织VEGF表达显著升高;(2)糖尿病大鼠视网膜组织MT表达略升高;(3)补锌可以抑制糖尿病大鼠视网膜组织VEGF表达升高,诱导糖尿病大鼠视网膜组织MT表达显著上调;(4)补锌可以改善糖尿病大鼠视网膜毛细血管超微结构的损害。
前言 | 第4-5页 |
中文摘要 | 第5-8页 |
Abstract | 第8-10页 |
英文缩略词 | 第13-14页 |
第1章 绪论 | 第14-15页 |
第2章 文献综述 | 第15-21页 |
第3章 材料与方法 | 第21-29页 |
3.1 实验材料 | 第21-24页 |
3.1.1 动物来源 | 第21页 |
3.1.2 主要试剂 | 第21-22页 |
3.1.3 主要试剂组成及配置 | 第22-24页 |
3.1.4 主要仪器 | 第24页 |
3.2 实验方法 | 第24-29页 |
3.2.1 糖尿病动物模型的建立 | 第24-25页 |
3.2.2 实验动物分组 | 第25页 |
3.2.3 标本的制备 | 第25页 |
3.2.4 免疫组织化学染色(PS 法)步骤 | 第25-26页 |
3.2.5 结果判定 | 第26页 |
3.2.6 数据分析 | 第26页 |
3.2.7 透射电镜标本制备 | 第26-29页 |
第4章 结果 | 第29-40页 |
4.1 视网膜组织 VEGF 免疫组织化学染色结果 | 第29-31页 |
4.2 视网膜组织 VEGF 免疫组织化学染色积分光密度(IOD)结果 | 第31-32页 |
4.3 视网膜组织 MT 免疫组织化学染色结果 | 第32-34页 |
4.4 视网膜组织 MT 免疫组织化学染色积分光密度(IOD)结果 | 第34-35页 |
4.5 视网膜组织透射电镜观察 | 第35-40页 |
第5章 讨论 | 第40-43页 |
第6章 结论 | 第43-44页 |
参考文献 | 第44-50页 |
作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第50-51页 |
致谢 | 第51页 |
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