左卡尼汀对小鼠氧诱导视网膜病变保护作用的实验研究

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目的建立氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠模型,观察高氧诱导的视网膜病理改变,并通过腹腔注射不同剂量的左卡尼汀,观察左卡尼汀是否对病变视网膜具有保护作用。方法选择7日龄C57BL/6J小鼠24只,随机分为正常对照组、高氧模型对照组、低剂量药物治疗组、高剂量药物治疗组,每组6只。除正常对照组外,其余组小鼠置于(75±2)%浓度的氧环境中饲养5天后,回到正常空气环境中饲养5天,建立氧诱导视网膜病变动物模型。对药物治疗组小鼠自7日龄起分别给予不同剂量的左卡尼汀,一次/天至小鼠17日龄。另两组给予相同体积的生理盐水。每组17日龄小鼠左眼行异硫氰酸葡聚糖荧光素(FITC-Dextran)灌注血管造影视网膜铺片观察视网膜血管形态变化。右眼石蜡切片行苏木精-伊红(HE)染色,光学显微镜下观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目,免疫组织化学染色观察血管内皮生长因子(VEGF)在视网膜各层的表达,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导缺口末端标记(TUNEL)染色,检测视网膜神经细胞凋亡数目。结果视网膜铺片结果显示,氧诱导视网膜病变模型鼠的视网膜中央及远周见无血管灌注区,周边部有大量新生血管形成;两治疗组均较高氧模型对照组视网膜血管分布均匀,新生血管和无灌注区显著减少。突破内界膜的内皮细胞核数:正常对照组为(0.4833±0.1169),高氧模型对照组为(33.85±2.53),两者比较有统计学意义(P<0.01);两治疗组分别为(19.03±4.43)、(12.37±1.62),与高氧模型对照组比较,组间差异具有统计学意义(F=76.059,P<0.01)。两药物治疗组显著下调了VEGF的表达,高剂量药物治疗组效果显著。两治疗组与高氧模型对照组比较,视网膜神经细胞凋亡数目显著减少,组间差异具有统计学意义(P=129.199,P<0.01)。结论氧诱导视网膜病变动物模型复制成功;左卡尼汀在一定程度上改善了OIR小鼠视网膜新生血管增殖情况并减少了视网膜神经细胞凋亡,从而对病变视网膜起保护作用。其机制可能与左卡尼汀抗氧化、清除氧自由基和抗凋亡作用有关。
摘要第2-3页
Abstract第3-4页
引言第7-9页
第一章 实验材料与方法第9-14页
    1.1 试验动物第9页
    1.2 主要实验仪器和实验试剂、药物第9页
        1.2.1 主要实验仪器和器械第9页
        1.2.2 主要实验试剂和药物第9页
    1.3 主要实验试剂的配制第9-10页
    1.4 实验模型的建立与分组第10页
        1.4.1 实验分组第10页
        1.4.2 模型的建立第10页
        1.4.3 小鼠腹腔注射第10页
    1.5 实验方法第10-13页
        1.5.1 常规石蜡包埋第11页
        1.5.2 异硫氰酸葡聚糖荧光素(FITC-Dextran)血管灌注造影视网膜铺片第11页
        1.5.3 视网膜HE染色第11页
        1.5.4 免疫组织化学检测血管内皮生长因子(VEGF)在视网膜的表达第11-12页
        1.5.5 TUNEL染色观察视网膜神经细胞凋亡第12-13页
    1.6 统计学处理第13-14页
第二章 实验结果第14-17页
    2.1 视网膜铺片观察实验各组视网膜血管分布第14页
    2.2 组织学观察及突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核计数第14-15页
    2.3 免疫组织化学检测血管内皮生长因子(VEGF)在视网膜的表达第15页
    2.4 视网膜神经细胞凋亡数目第15-17页
第三章 讨论第17-25页
    3.1 高氧诱导视网膜病变模型的建立及鉴定第17-19页
    3.2. 氧诱导视网膜病变第19页
    3.3. VEGF与氧诱导视网膜病变第19-20页
    3.4. 氧诱导视网膜病变中神经细胞的凋亡第20-21页
    3.5. 左卡尼汀对氧诱导视网膜病变的保护作用第21-25页
结论第25-26页
参考文献第26-31页
附图第31-46页
综述第46-60页
    综述参考文献第55-60页
攻读学位期间的研究成果第60-61页
致谢第61-62页
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