第一部分KLF9对PGC1a表达的调控以及在糖异生中的作用肝脏糖异生对于长时间饥饿情况下生物体的生存十分必要,但是在糖尿病情况下被非正常开启。已知转录共激活因子过氧化物酶体增殖受体Y共激活因子1(PGC1a)在此过程中发挥重要的生理功能。PGC1a是糖异生酶基因的上游调控因子,对于这些酶表达的激活发挥重要的调控功能。PGC1a被cAMP通路和转录因子CREB的激活所调控。KLF9是Kruppel-like factors锌指蛋白家族的成员,又称为基础转录序列结合蛋白1(BTEB1),是结合高GC结构序列的转录因子。KLF9能够调节孕酮受体(PR)的表达,其缺失会降低子宫PR目标基因对于孕酮的敏感性,导致生育能力低下。在肝脏中,KLF9结合促进HNF4a,调节甲状腺激素在肝脏中的作用。KLF9能够结合PPARγ启动子,调控脂肪组织的发育。通过体内和体外实验,我们证明了KLF9能够结合到PGC1a启动子并调节的PGC1a的表达,进而,对肝脏糖异生酶的表达量进行调控。在糖尿病模型小鼠上,降低KLF9的表达量,能够有效提高机体对胰岛素的敏感性,并且对糖尿病造成的高血糖具有改善效果。本实验首次证明了KLF9在机体糖代谢中发挥功能。第二部分PGC1a与PPARy共激活cidec的表达CIDEC基因是CIDE家族参与机体脂肪代谢合成的又一重要成员。有关它的报道主要关注于CIDEC在脂生成过程中的作用。在脂肪细胞分化过程中其表达水平显著升高。最近研究指示了CIDEC基因能促进细胞甘油三酯生成,并刺激脂滴增大。PPARγ是PPAR (Peroxisome Proliferator-Activated Receptor)家族的成员之一。它能与RXR形成异源二聚体,通过结合DNA启动子上的PPRE元件对基因的表达进行调控。PPARy是肝脏中负责调控脂肪合成的关键转录因子,在肝脏的表达比较低,一旦过表达后会引起脂肪肝的发生。本实验通过构建5’删切和顺式原件突变的启动子,运用HepG2细胞中双荧光报告基因实验检测PPARy和(?)(?)GC1a对CIDEC的共激活作用并确定顺式作用原件。使用PPARy特异激动剂pioglitazone刺激3T3-L1细胞检测(?) CIDEC的(?)水平。在3T3-L1细胞系中,过表达nRNA检CIDEC,测脂肪合成及能量代谢相关基因的水平。通过腺病毒感染在小鼠肝原代细mRNA胞中过表达检测肝脏细胞中脂肪变化。最终证明CIDEC,和PPARy能够显PGCla著激活的启动子,在体内引起脂肪的积累。CIDEC
