酵母培养物对瘤胃发酵影响及16S rRNA定量分析技术的应用研究
酵母培养物论文 瘤胃发酵论文 瘤胃细菌论文 16SrRNA论文
论文详情
本研究选择4头体重500~600kg安装有永久性瘤胃瘘管的阉牛,采用4×4拉丁方设计,在精粗比为55:45的日粮基础上分别补饲3种酵母培养物(YC),CT为对照组、DFM处理组补饲200g/d的DFM2、YS处理组补饲20g/d的Yea-sacc1026、XP处理组补饲100g/d的益康XP。试验期间采集瘤胃液和瘤胃内容物样品,分析饲喂周期内瘤胃pH值、NH3-N浓度、挥发性脂肪酸浓度的动态变化规律;测定内容物中羧甲基纤维素酶、水杨苷酶、木聚糖酶和微晶纤维素酶等4种纤维分解相关酶的活性;测定瘤胃中细菌总数,并合成了放射性标记的3种纤维分解菌(黄化瘤胃球菌、白色瘤胃球菌和产琥珀酸拟杆菌)的16S rRNA种特异性寡核苷酸探针和1种细菌通用探针,与从瘤胃内容物中分离出的RNA样品进行定量狭线印迹杂交,测定这3种纤维分解菌的相对含量。综合研究酵母培养物对瘤胃发酵的影响和发挥作用的方式,探讨以16S rRNA定量杂交分析法测定瘤胃特定功能细菌相对数量的可行性和准确性。 研究结果表明:(1)添加YC对肉牛瘤胃pH值影响不显著(p>0.05),但能提高饲喂后2hr的NH3--N浓度(p<0.05);(2)YS处理的乙、丙、丁酸和总挥发性脂肪酸在一个饲喂周期内的平均浓度比对照组有显著提高(p<0.05),DFM和XP处理组也有提高这些指标的趋势,但差异不显著;同时DFM和XP组的乙酸/丙酸比例有显著降低(p<0.01),XP组也有降低的趋势,但差异不显著;(2)显著提高瘤胃内羧甲基纤维素酶、水杨苷酶和木聚糖酶的活性(p<0.01),但是不影响微晶纤维素酶活(p=02363);(3)补饲YC增加了瘤胃总细菌数(p=0.0724),显著提高了3种瘤胃纤维分解菌(黄化瘤胃球菌、白色瘤胃球菌和产琥珀酸拟杆菌)总数和黄化瘤胃球菌数量在瘤胃细菌中的相对比例(p<0.01),但对白色瘤胃球菌(p=0.5432)和产琥珀酸拟杆菌(p=0.4177)在瘤胃细菌中的相对数量没有显著影响;(4)16S rRNA分析法测定结果表明3种纤维分解菌在瘤胃细菌中所占比例为3.80±0.2%。 综合分析上述结果,发现YC有提高瘤胃内羧甲基纤维素酶、水杨苷酶和木聚糖酶活性的效果,但不改变 代表纤维降解总效应的微晶纤维素酶活性,从酶学角度解释了YC能提高纤维的瘤胃降解起始速率而不改变总体降解率的现象;16s rRNA定量杂交分析法测定所得的结果与相关报道中采用最大似然数法和厌氧滚管法测定所得的结果相符,表明了该方法应用的可行性。
文献综述 | 第9-20页 |
引言 | 第9-11页 |
1. 细菌分类学中的新指标 | 第11页 |
2. 16S rRNA/rDNA基因序列分析在瘤胃细菌分类中的应用 | 第11-12页 |
3. 瘤胃细菌16S rRNA/rDNA序列分析技术 | 第12-17页 |
3.1 核酸分子序列的获得 | 第12-14页 |
3.1.1 菌体细胞裂解 | 第12-13页 |
3.1.2 16S rRNA分子直接抽提 | 第13页 |
3.1.3 定量PCR扩增16S rDNA序列 | 第13-14页 |
3.2 16S rRNA/rDNA碱基序列分析方法 | 第14-17页 |
3.2.1 核酸序列测定 | 第14页 |
3.2.2 遗传指纹技术 | 第14-15页 |
3.2.3 RNA印迹杂交分析 | 第15页 |
3.2.4 荧光原位杂交技术 | 第15-16页 |
3.2.5 DNA芯片技术 | 第16-17页 |
3.3 核糖体核酸序列数据库 | 第17页 |
4. 展望 | 第17-20页 |
试验研究 | 第20-52页 |
1. 前言 | 第20-21页 |
2. 材料与方法 | 第21-26页 |
2.1 实验动物与饲养管理 | 第21页 |
2.2 添加剂种类与饲喂方法 | 第21页 |
2.3 试剂与溶液 | 第21-22页 |
2.4 试验设计及统计分析 | 第22页 |
2.5 样品采集和处理 | 第22-23页 |
2.6 分析测定方法 | 第23-26页 |
2.6.1 挥发性脂肪酸(VFA)的测定 | 第23页 |
2.6.2 NH3-N浓度测定 | 第23页 |
2.6.3 总菌数测定 | 第23页 |
2.6.4 三种纤维分解菌数量测定 | 第23-25页 |
2.6.5 酶活力测定 | 第25-26页 |
3. 结果 | 第26-52页 |
3.1 饲喂不同酵母培养物后瘤胃发酵的动态变化规律 | 第26-33页 |
3.1.1 瘤胃pH值 | 第26-27页 |
3.1.2 瘤胃NH_3-N浓度 | 第27-29页 |
3.1.3 瘤胃挥发性脂肪酸(VFA)浓度 | 第29-33页 |
3.2 瘤胃纤维降解相关酶的活性 | 第33-40页 |
3.2.1 不同处理组的羧甲基纤维素酶活性 | 第33-35页 |
3.2.2 不同处理组的水杨苷酶括性 | 第35-37页 |
3.2.3 不同处理组的木聚糖酶活性 | 第37-38页 |
3.2.4 不同处理组的微晶纤维素酶活性 | 第38-40页 |
3.3 瘤胃细菌的数量 | 第40-52页 |
3.3.1 探针的设计和配比结果 | 第40-44页 |
3.3.2 不同处理对瘤胃细菌总数的影响 | 第44-45页 |
3.3.3 不同处理对黄化瘤胃球菌的影响 | 第45-47页 |
3.3.4 不同处理对白色瘤胃球菌的影响 | 第47-49页 |
3.3.5 不同处理对产琥珀酸拟杆菌的影响 | 第49-50页 |
3.3.6 不同处理对3种纤维分解菌总数量的影响 | 第50-52页 |
4. 讨论 | 第52-56页 |
4.1 不同处理对瘤胃发酵的影响 | 第52-53页 |
4.2 不同处理对瘤胃细菌的影响 | 第53-54页 |
4.3 不同处理对瘤胃纤维分解相关酶活性的影响 | 第54-55页 |
4.4 16SrRNA种特异性寡核苷酸探针的选择 | 第55-56页 |
4.5 探针杂交法用于瘤胃细菌定量研究的可行性 | 第56页 |
5. 结论 | 第56-58页 |
5.1 YC对瘤胃发酵的调控作用 | 第56页 |
5.2 YC对瘤胃细菌数量的影响 | 第56-57页 |
5.3 YC对瘤胃纤维分解相关酶活性的影响 | 第57页 |
5.4 饲料纤维的瘤胃降解机理 | 第57页 |
5.5 不同YC产品的作用效果 | 第57页 |
5.6 探针定量杂交法分析瘤胃细菌的应用前景 | 第57-58页 |
参考文献 | 第58-64页 |
致谢 | 第64页 |
论文购买
论文编号
ABS1416619,这篇论文共64页
会员购买按0.30元/页下载,共需支付
19.2。
不是会员,
注册会员!
会员更优惠
充值送钱!
直接购买按0.5元/页下载,共需要支付
32。
只需这篇论文,无需注册!
直接网上支付,方便快捷!
相关论文