背景结直肠癌是近年来国内发病率和死亡率均呈上升趋势的肿瘤之一,发病率仅次于肺癌、胃癌和肝癌,而国外结直肠癌的发病率有所下降但仍处于恶性肿瘤的第2或3位。随着社会的进步、生活水平的提高,人们饮食结构及生活习惯的不断变化,我国结直肠癌的发病率从上世纪60年代的10/10万,上升到目前的36.1/10万。目前手术仍是治疗结直肠癌的关键手段,近20年来,大肠癌根治术的方法不断改进,但是患者的预后并未明显改善,行根治术的患者约有30%～40%在5年内出现转移和复发。这些患者在手术前后的常规检查中,未发现显性转移,而微小的转移灶却客观存在。因此,及时发现微转移不仅对大肠癌复发和预后的判断有重要意义,而且对指导临床治疗也有特殊的价值。而分子生物学的特异性标记物正是检测结直肠癌微转移的有效指标。目的探讨转录因子AP-4在结直肠癌局部淋巴结中的表达情况,判定其是否评估淋巴结隐匿性转移存在与否的一个有效指标;了解AP-4表达与结直肠癌复发的关系;为临床结直肠癌的分子生物学分期、判断预后及指导临床治疗提供有价值的参考。方法1、应用免疫组织化学法检测73例患者的594枚结直肠癌淋巴结组织(1-33枚/例,中位数为10枚/例),病理HE染色证实有转移的258枚,无明显转移正常淋巴结336枚,检测AP-4的表达及其临床病理参数的关系。判断标准:AP-4蛋白在石蜡切片中阳性表达主要定位于细胞核,呈棕黄色颗粒,根据阳性细胞在全部组织细胞中所占比例以及阳性细胞染色强度,对AP-4表达做半定量判定,结果由两位有经验的病理科医生评定,取其均数。判定实验结果:A:按显色细胞数记分,肿瘤细胞内无阳性染色者为0分,阳性细胞率≤10%为1分,11%~50%为2分,51%~75%为3分,>75%为4分。B:按细胞显色深浅记分,无阳性反应细胞为0分,浅黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分。积分数=A×B。0定为-,1～4分为+,5～8分为++,9～12分为+++。2、采用手术切除28例结直肠癌患者的280枚直径≥5mm的新鲜淋巴结(1-41枚/例,中位数为6.5枚/例),通过RT-PCR方法,检测AP-4在新鲜结直肠癌淋巴结组织中的表达。3、采用SPSS13.0统计分析软件进行分析,对AP-4的表达与临床病理因素的关系采用卡方检验,P<0.05为有统计学意义。结果1、免疫组织化学:(1)在73例患者中的594枚结直肠癌淋巴结组织中有314枚淋巴结检出AP-4表达阳性(阳性表达率为52.86%),258枚有转移的淋巴结组织中有242枚淋巴结AP-4表达阳性(阳性表达率93.80%),336枚HE染色正常的淋巴结组织中有72枚淋巴结AP-4表达阳性(阳性表达率为21.43%);(2)47例Ⅲ-Ⅳ期的患者仅有3例淋巴结检测阴性,余44例患者的1枚或者更多枚淋巴结被检测出AP-4表达阳性(93.62%);26例处于Ⅰ~Ⅱ期患者中,有11例(42.31%)患者的淋巴结检测AP-4表达阴性(P<0.01),其余15例(57.69%)患者的1枚或者更多枚淋巴结被检出AP-4表达阳性;(3)AP-4表达与患者性别、年龄、肿瘤位置、大体类型之间无显著相关(P>0.05),与肿瘤分化程度、浸润深度及Duke`s分期之间有显著相关(P<0.05)。2、RT-PCR: 28例患者中有23例检出1枚或者多枚淋巴结AP-4表达阳性,组织学检查有肿瘤转移的15例59个淋巴结,经PCR检测均为阳性,组织学检查阴性的13例221个淋巴结中,有8例Dukes A、B期患者51个淋巴结经PCR检测为阳性。结论1、AP-4可作为评估淋巴结隐匿性转移存在与否的一个有效指标;2、AP-4在局部淋巴结中高表达可能预示结直肠癌高复发风险;3、AP-4为结直肠癌的分子生物学分期、判断预后及指导临床治疗提供有价值的参考。
