贵州省部分主要甘蓝型油菜杂交种及其亲本指纹图谱构建与纯度鉴定

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本研究利用形态学方法与SSR分子标记方法对贵杂系列等推广面积较广和生产潜力较大的油菜杂交种及其亲本共43份材料进行研究,探讨了不同方法用于种质鉴定的异同,筛选出了一批在贵杂系列油菜亲本和杂交种上具有较高多态性的SSR引物,构建了贵杂系列油菜亲本及杂交组合的指纹图谱。研究主要结果如下: 1.对贵杂系列油菜杂交种及其亲本的形态学性状进行观测,指出形态学方法是鉴定种子真实性和纯度最为通用的方法。但此法存在诸多不足。 2.通过对24份甘蓝型油菜亲本的SSR分析,从100对SSR引物中筛选到21对多态性很强且极易识别的引物。选取21对引物中4对引物(Na12C06、Na10804b、Ol10A05、Na10D03),利用他们的指纹组合,构建了贵杂系列常用油菜亲本的指纹图谱。 3.本研究同时对24份油菜亲本组配的贵杂系列油菜目前生产上使用较广或生产潜力较大的19个油菜杂交组合进行了SSR分析,从100对引物中筛选到22对适合油菜杂交种的多态性引物。选取4对引物(Na12C06、Na10D03、Na10E02c、Ol10A05),利用他们的指纹组合,构建了贵杂系列常用油菜杂交组合的指纹图谱,区分开了所有不同供试杂交组合。 4.利用SSR分子标记能够有效鉴定杂交种纯度,经人工掺杂实验验证,此方法准确可靠。 5.利用引物组合法,将几对核心引物组合起来进行扩增,可以用来鉴定甘蓝型油菜杂交组合及其亲本的真实性和纯度的。
摘要第13-14页
Abstract第14页
1 前言第15-31页
    1.1 油菜在生产中的重要地位第15页
    1.2 油菜起源以及我国油菜的研究进展第15-18页
    1.3 贵州油菜品种资源的特殊性及其对全国油菜种质更新的重要意义第18-19页
    1.4 油菜品种资源的评价鉴定的研究方法的演替第19-26页
        1.4.1 常规鉴定技术第19-21页
            1.4.1.1 种子形态学鉴定第19页
            1.4.1.2 田间形态学鉴定第19页
            1.4.1.3 生化标记第19-21页
                1.4.1.3.1 同工酶第20-21页
                1.4.1.3.2 种子贮藏蛋白第21页
        1.4.2 分子标记技术第21-26页
            1.4.2.1 分子标记技术的发展第21-22页
            1.4.2.2 DNA标记的类型第22-23页
            1.4.2.3 常用的DNA分子标记技术第23-26页
                1.4.2.3.1 限制性片段长度多态性(RFLP)第23页
                1.4.2.3.2 随机扩增多态性DNA(RAPD)第23-24页
                1.4.2.3.3 扩增片段长度多态(AFLP)第24-25页
                1.4.2.3.4 特定序列位点(STS)第25页
                1.4.2.3.5 简单序列重复(SSR)第25-26页
    1.5 分子标记技术在油菜遗传育种中的应用第26-30页
        1.5.1 遗传图谱的构建第26-27页
        1.5.2 遗传多样性研究第27-29页
        1.5.3 重要性状基因的图谱定位和标记辅助选择第29-30页
    1.6 本研究的目的和意义第30-31页
2 材料与方法第31-34页
    2.1 材料第31-32页
    2.2 试验方法第32-34页
        2.2.1 田间种植的形态学鉴定第32页
        2.2.2 SSR分析第32-34页
            2.2.2.1 DNA提取第32-33页
            2.2.2.2 DNA检测第33页
            2.2.2.3 SSR分析第33-34页
                2.2.2.3.1 PCR反应体系第33页
                2.2.2.3.2 PCR扩增程序第33-34页
                2.2.2.3.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳第34页
                2.2.2.3.4 硝酸银染色第34页
            2.2.2.4 数据处理第34页
3 结果与分析第34-51页
    3.1 供试油菜杂交种材料的形态学性状观测及调查第34-40页
    3.2 甘蓝型杂交油菜亲本的DNA指纹图谱第40-42页
        3.2.1 甘蓝型杂交油菜亲本的多态性引物筛选第40-41页
        3.2.2 甘蓝型杂交油菜亲本的DNA指纹图谱构建第41-42页
    3.3 油菜杂交组合的DNA指纹图谱第42-44页
        3.3.1 油菜杂交组合的多态性引物筛选第42-43页
        3.3.2 油菜杂交组合DNA指纹图谱的构建第43-44页
    3.4 贵杂系列油菜杂交组合纯度鉴定第44-51页
        3.4.1 用于贵杂系列油菜杂交组合纯度鉴定的引物筛选第44-45页
        3.4.2 利用SSR标记技术进行杂交组合纯度的准确性判别第45-47页
        3.4.3 引物组合法在油菜亲本及其杂交种鉴定中的研究第47-51页
            3.4.3.1 亲本材料的引物组合扩增图谱分析第47-48页
                3.4.3.1.1 2对引物组合的扩增图谱第47-48页
                3.4.3.1.2 3对引物组合的扩增图谱第48页
            3.4.3.2 杂交种的引物组合扩增图谱分析第48-51页
                3.4.3.2.1 2对引物组合的扩增图谱第48-49页
                3.4.3.2.2 3对引物组合的扩增图谱第49-51页
4 结论与讨论第51-55页
    4.1 形态学方法对油菜杂交种纯度鉴定的评价第51页
    4.2 DNA指纹图谱技术在油菜品种鉴定中的应用第51-54页
        4.2.1 绘制新品种的指纹图谱,保护专利权第51-52页
        4.2.2 分析、检验品种的真实性及纯度第52-53页
        4.2.3 关于引物组合法在油菜亲本及其杂交种鉴定中的应用第53-54页
    4.3 本研究拟开展的后续工作第54-55页
致谢第55-56页
主要参考文献第56-60页
图版第60-68页
附录第68-69页
原创性声明第69页
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