大鼠视网膜兴奋损伤中HSP70与TNF-α表达的相关性研究

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目的探讨大鼠视网膜兴奋损伤中HSP70与TNF-α表达的相关变化。方法健康成年清洁级Wistar大鼠50只随机分为三组,正常对照组(5只)、阳性对照组即NMDA玻璃体腔注射组(20只)、实验组即NMDA玻璃体腔注射组+硫酸锌腹腔注射组(25只)。实验组腹腔注射硫酸锌(24.6mg/Kg),10h后随即处死5只。14h后实验组和阳性对照组均做单眼的玻璃体腔注射NMDA (2μl 80mmol/l),并做好标记。NMDA注射后2h,8h,16h,24h,实验组和阳性组各组均随机处死5只大鼠。正常对照组不做任何处理,可以于任何时间点处死。HE染色光镜下观察各组视网膜组织的形态学变化,实时定量RT-PCR方法观察视网膜TNF-αmRNA和HSP70mRNA表达的变化。结果1.HE染色:正常对照组大鼠视网膜组织结构层次清楚,染色均匀,细胞形态规则。阳性对照组造模后2h,神经节细胞开始水肿;造模后8h,神经节细胞水肿最严重,其内可见空泡,视网膜增厚;造模后16h,神经节细胞水肿较前减轻,排列疏松,形态不规则,可见核固缩,数量减少;造模后24h,神经节细胞数目减少排列紊乱,核固缩明显,神经纤维层、神经节细胞层变薄。各时间点实验组与阳性对照组相比,视网膜的厚度较厚,存活的视网膜神经节细胞的数量较多,损伤均轻于阳性对照组。2.荧光定量RT-PCR:正常对照组大鼠视网膜未见TNF-αmRNA表达,可见HSP70微量表达。阳性对照组中NMDA注射后2h, TNF-αmRNA水平较正常对照组上调(P<0.05),注射后8h, TNF-αmRNA水平达高峰(P<0.05),注射后16h表达量降低,但仍高于对照组(P<0.05),注射后24h, TNF-αmRNA表达量与16h无差别(p>0.05),较正常对照组增多(P<0.05); NMDA注射后2h, HSP70 mRNA水平较正常对照组上调(P<0.05),注射后8h, HSP70 mRNA水平明显上调(P<0.05),注射后16h表达量达高峰(P<0.05),注射后24h, HSP70 mRNA表达量降低,较正常对照组增多(P<0.05)。实验组中硫酸锌注射后10h TNF-αmRNA未见表达,NMDA注射后2h,TNF-αmRNA水平较正常对照组上调(P<0.05),较阳性对照组下降(P<0.05),注射后8h,TNF-αmRNA水平达高峰(P<0.05),较阳性对照组下降(P<0.05),注射后16h表达量降低,但仍高于对照组(P<0.05),较阳性对照组下降(P<0.05),注射后24h,TNF-αmRNA表达量与16h无差别(p>0.05),较阳性对照组下降(P<0.05),较正常对照组增多(P<0.05);硫酸锌注射后10h HSP70 mRNA水平较正常对照组上调(P<0.05),NMDA注射后2h,HSP70 mRNA水平明显上调(P<0.05),较阳性对照组增加(P<0.05),注射后8h, HSP70 mRNA水平达高峰,与2h的无差别(p>0.05),较阳性对照组增加(P<0.05),注射后16h,HSP70 mRNA水平与8h的无差别(p>0.05),较阳性对照组增加(P<0.05),注射后24h,HSP70 mRNA水平下降,较阳性对照组增加(P<0.05)。结论在视网膜兴奋损伤中,硫酸锌可增加HSP70的表达量,降低TNF-α的表达量,随着HSP70的表达量的增加,TNF-α表达量下降,表明HSP70对TNF-α的表达有抑制作用。
摘要第2-4页
Abstract第4-5页
引言第7-9页
第1章 材料与方法第9-17页
    1.1 实验材料第9-10页
    1.2 实验方法第10-16页
    1.3 统计学分析第16-17页
第2章 结果第17-19页
    2.1 HE染色结果第17页
    2.2 实时定量RT-PCR结果第17-19页
第3章 讨论第19-24页
    3.1 兴奋性损伤模型的建立第19-20页
    3.2 兴奋性损伤后TNF-α的表达第20页
    3.3 锌与HSP70的表达第20-21页
    3.4 TNF-α与HSP70的相关第21-22页
    3.5 HSP70抑制TNF-α的可能作用机制第22-24页
结论第24-25页
参考文献第25-28页
附录第28-34页
综述第34-43页
    综述的参考文献第40-43页
攻读学位期间的研究成果第43-44页
致谢第44-45页
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