MicroRNA(miRNA)是近年来新发现的一类内源性非编码小分子RNA,长约18-25 nt,其序列在物种间具有高度保守性。miRNA通过与靶基因的3’非翻译区(3’UTR)上的靶序列结合抑制靶mRNA的翻译或降解靶mRNA,发挥其基因沉默效应。研究表明,miRNA参与了真核生物的生长、发育、组织分化、信号转导、新陈代谢、疾病及死亡等生理病理过程。miRNA被证明在肿瘤的发生发展过程中也发挥了重要作用,其作用的机制尚不明确。转录因子ZEB1(zinc-finger E-box binding homeobox 1),又称为TCF8或δEF1,可以负调控多种基因的表达,如IL-2、p73、GATA-3、collagenⅠ/Ⅱ等。ZEB1还可通过抑制E-cadherin的表达促进肿瘤细胞的侵袭转移能力。microRNA-200c,属于microRNA-200家族成员,研究发现其与ZEB1与microRNA-200c之间可相互抑制,形成负反馈机制调节肿瘤细胞的侵袭转移能力。本研究为了验证此负反馈调节机制是否也在胃癌及其他肿瘤细胞系中发挥作用,我们检测了几种肿瘤细胞系中ZEB1基因的表达水平与肿瘤细胞的侵袭迁移能力,分析ZEB1基因的表达水平与肿瘤细胞侵袭迁移能力的关系,并通过在胃癌SGC-7901细胞中转染microRNA-200c观察其对胃癌SGC-7901细胞生物学行为的影响,为抑制肿瘤细胞的侵袭转移提供新的思路与方法。本研究分两部分:1、选取正常胃黏膜GES-1细胞,胃癌BGC-823、SGC-7901细胞、宫颈癌HeLa细胞及肺癌A549细胞,Real-time PCR检测各细胞系中ZEB1基因的表达量,Transwell法检测各细胞系的迁移及侵袭能力,将ZEB1基因的表达量与各细胞系的迁移及侵袭数目做相关性分析,发现ZEB1与肿瘤细胞的迁移及侵袭数目呈正相关,表明ZEB1与肿瘤细胞的侵袭及迁移能力有相关性。2、利用脂质体Lipofectamin 2000将人工合成的microRNA-200c转染SGC-7901细胞,并设空白转染组及无关序列转染组,转染24 h后Real-time PCR检测各转染组中ZEB1基因的表达量,Transwell小室法检测各转染组细胞迁移及侵袭能力的变化。结果表明转染microRNA-200c能明显抑制了SGC-7901细胞ZEB1基因的表达及细胞迁移和侵袭能力。以上研究结果表明,在GES-1、BGC-823、SGC7901、A549及HeLa细胞系中,ZEB1基因的表达水平与肿瘤细胞的侵袭及迁移能力相关,microRNA-200c能抑制ZEB1基因的表达从而抑制肿瘤细胞的迁移及侵袭能力。
