目的通过测定体外培养的正常SD大鼠和慢性前列腺炎SD大鼠前列腺平滑肌细胞内游离钙离子浓度,来了解慢性前列腺炎前列腺平滑肌细胞与正常前列腺平滑肌细胞内游离钙离子浓度的差异及其意义,从而探讨细胞内游离钙离子在慢性前列腺炎发生发展中的作用。方法随机将50只大鼠等分为炎症组和正常对照组,取10只正常SD大鼠进行前列腺蛋白的提取纯化,分别于第0、30 d对炎症组每只大鼠进行皮内多点注射大鼠前列腺蛋白提纯液和FCA乳剂(比例为1∶1的混悬液)1.0ml,浓度为40mg/ml,每只腹腔注射百白破疫苗0. 5 ml,以造成自身免疫性的慢性前列腺炎症,另取正常SD大鼠同样方法注射生理盐水作为对照组;造模45天后,每只大鼠取部分前列腺组织HE染色,石蜡包埋切片后组织学观察,证实造模成功后离体培养SD大鼠前列腺平滑肌细胞,运用差速贴壁法纯化前列腺平滑肌细胞,运用免疫组化SP法证实培养出来的细胞为平滑肌细胞;用消化法将细胞制成细胞悬液,将高度特异性钙离子荧光指示剂Fluo 3-AM加入该细胞悬液中,置二氧化碳培养箱中孵育1h负载细胞,离心,去掉多余的染料。用无钙缓冲液反复洗涤3次,最后应用流式细胞仪对细胞内钙离子浓度进行检测。结果通过流式细胞仪用480nm波长激发Fluo 3-AM,检测慢性前列腺炎组SD大鼠以及对照组SD大鼠前列腺平滑肌细胞内钙离子在发射波长为525nm时的荧光强度值,分析比较测得平行荧光强度值发现模型组的荧光值明显高于正常对照组SD大鼠(P<0.05),差异有显著性。结论当用480nm波长激发Fluo 3-AM时,其荧光强度与游离钙离子浓度成正比,以上结果表明慢性前列腺炎SD大鼠平滑肌细胞内钙离子浓度较正常SD大鼠是升高的,我们认为由于慢性前列腺炎引起的前列腺平滑肌细胞内游离钙离子浓度的升高,导致了钙稳态产生波动,使细胞内产生钙超载等一系列活动,继而影响到前列腺组织及细胞的各项生理功能,前列腺平滑肌细胞内游离钙离子浓度变化可能是慢性前列腺炎发病的重要影响因素,PSMCs内游离钙离子浓度在发病机制中具有一定作用。
