目的利用毕氏酵母血管生成素1重组质粒(pEGFP/Ang-1)转染大鼠BMSCs,将转染后的BMSCs行视网膜下移植,从而确认血管紧张素1(Ang-1)转染BMSCs对糖尿病大鼠视网膜的保护作用。方法选取雄性SD大鼠4~6只,无菌条件下取出股骨和胫骨,剪去骨骺端,用培养基反复冲洗骨髓腔分离BMSCs,并结合反复贴壁法使其进一步纯化鉴定。利用毕氏酵母血管生成素1重组质粒(pEGFP/Ang-1)转染大鼠BMSCs,将转染后的Ang-1/BMSC视网膜下移植。另选SD大鼠96只,随机分为正常大鼠组(CON)、空白对照糖尿病组(DM1)、糖尿病大鼠+视网膜下移植BMSCs组(DM2)、糖尿病大鼠+视网膜下移植Ang-1/BMSCs组(ANG)。尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型,成模后DM2组视网膜下移植BMSCs,ANG组视网膜下移植Ang-1/BMSCs,分别4w、8w、12w处死动物。用伊凡思蓝方法检测视网膜的渗透量;用免疫组化观察移植细胞在视网膜中的分布融合情况,Western blot方法检测各组大鼠视网膜Ang-1的表达情况。结果DM1、DM2组糖尿病大鼠渗透量较大,并随时间延长渗透性逐渐增加; ANG组视网膜下移植Ang-1/BMSCs能够明显抑制这种变化。免疫组化分析证实移植Ang-1/BMSCs主要整合在糖尿病大鼠视网膜节细胞层和内颗粒层。Western blot分析证明随着糖尿病视网膜病变的发生发展,DM1、DM2组糖尿病大鼠视网膜中Ang-1的表达量显著减少,而ANG组中Ang-1表达量较DM1、DM2显著增加,与CON、DM1、DM2组比较差异有统计学意义(P < 0.05), DM1与DM2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论1. Ang-1/BMSCs视网膜下移植后见移植细胞整合在节细胞层和内颗粒层。2. Ang-1/BMSCs视网膜下移植可以改善糖尿病大鼠视网膜微循环。
