糖尿病大鼠急性心肌缺血诱发心脏神经节和心肌表达SP、CGRP和Ach的特征
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目的研究糖尿病大鼠急性心肌缺血诱发心脏神经节细胞和心房肌、心室肌对P物质(substance P,SP)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)和乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)表达特性,观察心脏神经节和心肌在急性心肌缺血中产生SP、CGRP和Ach的生物学特征以及糖尿病对其影响。探讨糖尿病对心脏神经节和心肌产生SP、CGRP和Ach的影响,为进一步揭示糖尿病对心脏功能、结构、电生理病理性影响的机制提供依据。方法实验共分三部分:1、采用HE、NISSL body染色、原位杂交及免疫荧光技术,观察心脏神经节的分布规律、形态特征,明确神经节的类型,观察心脏神经节细胞对P物质(substance P,SP)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)和乙酰胆碱(Acetylcholine, Ach)的表达与共表达特性。2、通过建立急性心肌缺血模型,本研究拟采用免疫荧光和酶联免疫吸附试验,从分子水平和蛋白表达水平观察急性心肌缺血早期心脏神经节内SP、CGRP和Ach的表达与变化,为了解心脏神经节在急性心肌缺血损伤中的作用及其机制提供依据。3、通过建立糖尿病急性心肌缺血模型,采用酶联免疫吸附试验从蛋白表达水平观察糖尿病大鼠在急性心肌缺血早期心脏神经节内SP和CGRP的表达与变化,为了解心脏神经节在糖尿病大鼠急性心肌缺血损伤中的作用及其机制提供依据。结果1、心脏神经节主要分布于脂肪组织中、大血管周围、心房外膜以及心房肌间,有的也散在于心室肌间。心脏中存在SP和Ach、CGRP和Ach的共表达神经元细胞。2、①与手术对照组相比,CAO后30min SP在大鼠缺血心脏心房组织及左心室缺血区心肌组织中的含量均上调,而在心房组织中上调更明显(P<0.05);②与手术对照组相比,CAO后30min CGRP在大鼠缺血心脏心房组织及左心室缺血区心肌组织中的含量均显著上调(P<0.05);③与手术对照组相比,CAO后30min Ach在大鼠缺血心脏心房组织及左心室缺血区心肌组织中的含量均显著上调(P<0.05)。3、①糖尿病大鼠在CAO后30min其心房和心室中SP和CGRP的表达比手术对照组均上调,其中CGRP在心室中的表达明显上调。但是其上调幅度均较非糖尿病大鼠明显降低;②给予小剂量辣椒素(20mg/kg)干预后的糖尿病大鼠在CAO后30min其缺血心房和心室中的SP和CGRP比手术对照组均明显上调。而且经小剂量辣椒素干预的糖尿病大鼠的缺血心肌对SP和CGRP表达上调的幅度较糖尿病大鼠明显增大。结论1、心脏神经节主要分布于心房周围的脂肪组织中、大血管周围、心房外膜以及心房肌间,也有的散在分布于心室肌间。神经节内存在SP和CGRP与Ach的共表达神经元细胞。2、急性心肌缺血诱发心房肌表达SP上调,心房肌、心室肌表达CGRP上调。3、糖尿病导致急性心肌缺血时心肌表达SP和CGRP下调。4、小剂量的辣椒素可部分逆转糖尿病对急性心肌缺血时心肌表达SP和CGRP的下调作用。
缩略语表 | 第6-7页 |
摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-10页 |
前言 | 第11-12页 |
第一部分:大鼠心脏神经节细胞对 SP、CGRP 和 Ach 的表达与共表达特性的研究 | 第12-17页 |
引言 | 第12页 |
1 材料和方法 | 第12-14页 |
1.1 实验动物 | 第12页 |
1.2 主要试剂 | 第12页 |
1.3 主要仪器 | 第12-13页 |
1.4 实验程序 | 第13-14页 |
1.5 统计学处理 | 第14页 |
2 结果 | 第14-15页 |
3 讨论 | 第15-17页 |
第二部分 结扎大鼠冠状动脉对心脏神经节细胞表达 SP、CGRP 和 Ach 的影响 | 第17-25页 |
引言 | 第17页 |
1 材料和方法 | 第17-19页 |
1.1 实验动物 | 第17页 |
1.2 主要试剂 | 第17页 |
1.3 主要仪器 | 第17页 |
1.4 实验程序 | 第17-19页 |
1.5 统计分析 | 第19页 |
2 结果 | 第19-23页 |
2.1 免疫荧光分析显示 | 第19-20页 |
2.2 总蛋白定量以及 ELISA 检测的标准曲线 | 第20-21页 |
2.3 CAO 后 30min SP 在缺血心肌组织中的表达 | 第21-22页 |
2.4 CAO 后 30min CGRP 在缺血心肌组织中的表达 | 第22页 |
2.5 CAO 后 30min Ach 在缺血心肌组织中的表达 | 第22-23页 |
3 讨论 | 第23-25页 |
第三部分 糖尿病大鼠结扎冠状动脉后对心脏神经节细胞表达 CGRP 和 SP 的影响 | 第25-36页 |
引言 | 第25页 |
1 材料和方法 | 第25-26页 |
1.1 实验动物 | 第25页 |
1.2 主要试剂 | 第25页 |
1.3 主要仪器 | 第25页 |
1.4 实验程序 | 第25-26页 |
1.5 统计分析 | 第26页 |
2 结果 | 第26-34页 |
2.1 总蛋白定量以及 ELISA 检测的标准曲线 | 第26-31页 |
2.2 SP 在糖尿病大鼠缺血心房组织中的表达 | 第31-32页 |
2.3 SP 在糖尿病大鼠缺血心室组织中的表达 | 第32页 |
2.4 CGRP 在糖尿病大鼠缺血心房组织中的表达 | 第32-33页 |
2.5 CGRP 在糖尿病大鼠缺血心室组织中的表达 | 第33-34页 |
3 讨论 | 第34-36页 |
第四部分 结论 | 第36-37页 |
第五部分 综述 | 第37-41页 |
一、P 物质的研究进展 | 第37-39页 |
1、SP 的生物学特性 | 第37-38页 |
2、P 物质的心血管效应 | 第38-39页 |
3、结语及展望 | 第39页 |
二、CGRP 的研究进展 | 第39-41页 |
1、CGRP 的生物学特性 | 第39-40页 |
2、CGRP 的心血管效应 | 第40页 |
3、结语及展望 | 第40-41页 |
参考文献 | 第41-48页 |
一、实验部分 | 第41-45页 |
二、综述部分 | 第45-48页 |
附图 | 第48-51页 |
个人简介 | 第51-52页 |
致谢 | 第52页 |
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