CREB磷酸化调控参与海马神经元过度兴奋神经损伤机理研究

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目的:神经元过度兴奋与癫痫、中风及部分神经退行性疾病中的神经元损伤坏死有关,会导致严重的认知和运动障碍,但是其作用机制尚未阐明。本文采用红藻氨酸(Kainic acid,KA)诱导的神经元过度兴奋模型,探讨钙调神经磷酸酶(Calcineurin,CaN)调节CREB和BAD蛋白质磷酸化对神经元功能和结构的影响。方法:建立红藻氨酸诱导的神经元过度兴奋大鼠模型,给予CaN抑制剂他克莫司(Tacrolimas,FK506)干预对比生理盐水处理的大鼠;用Morris水迷宫试验检测大鼠学习记忆能力变化情况;甲苯胺蓝染色用以观察大鼠海马神经元数量及结构变化;用蛋白质印迹(western blot)检测大鼠海马P-CREB和P-BAD蛋白的表达水平情况。结果:Morris水迷宫试验检测发现神经元过度兴奋大鼠抑制CaN活性后与对照组相比学习、空间记忆能力有明显提高。甲苯胺蓝染色可以观察到大鼠海马CA3区神经细胞缺失,给予FK506抑制CaN活性后神经细胞缺失情况有显著改善。Western blot分析发现神经元过度兴奋大鼠抑制CaN活性对比生理盐水组大鼠海马区P-CREB和P-BAD蛋白表达水平增加。结论:FK506处理可以削弱神经元过度兴奋对神经元功能和结构影响,减少大鼠海马神经元损失从而提高大鼠学习、记忆能力。FK506处理还导致大鼠海马CaN下游CREB和BAD磷酸化水平显著增加,同时伴随海马区神经细胞丢失减少,揭示CaN激活可能参与神经细胞死亡调控,在神经元过度兴奋损伤过程中起重要作用。
摘要第4-5页
ABSTRACT第5页
第一章 绪论第9-17页
    1.1 神经元过度兴奋相关神经退行性变疾病第10-11页
    1.2 神经元过度兴奋模型第11-12页
    1.3 钙调神经磷酸酶第12-13页
    1.4 CaN 与关键蛋白磷酸化第13-14页
    1.5 CaN 抑制剂第14-15页
    1.6 研究思路第15-16页
    1.7 技术路线第16-17页
第二章 神经元过度兴奋大鼠学习记忆能力和海马结构变化第17-33页
    2.1 材料和仪器第17-20页
        2.1.1 实验动物第17-18页
        2.1.2 实验试剂第18页
        2.1.3 实验仪器设备第18-19页
        2.1.4 主要实验溶液配制第19-20页
    2.2 实验方法第20-25页
        2.2.1 大鼠给药第20-22页
        2.2.2 大鼠Morris 水迷宫试验第22-23页
        2.2.3 大鼠灌注取材第23页
        2.2.4 冰冻切片制备第23-24页
        2.2.5 甲苯胺蓝染色第24-25页
        2.2.6 图像采集第25页
        2.2.7 统计分析第25页
    2.3 实验结果第25-30页
        2.3.1 大鼠学习记忆能力变化第25-29页
        2.3.2 大鼠海马结构的变化第29-30页
    2.4 讨论第30-31页
    2.5 结论第31-33页
第三章 FK506 影响P-CREB 和P-BAD 在神经元过度兴奋大鼠海马中表达第33-47页
    3.1 材料和试剂第33-38页
        3.1.1 实验动物第33-34页
        3.1.2 实验试剂第34-35页
        3.1.3 实验仪器设备第35-36页
        3.1.4 主要实验溶液配制第36-38页
    3.2 实验方法第38-43页
        3.2.1 大鼠侧脑室给药第38-39页
        3.2.2 大鼠海马总蛋白提取第39页
        3.2.3 蛋白浓度测定第39-40页
        3.2.4 蛋白质SDS-PAGE 电泳第40-41页
        3.2.5 Western-blot 检测第41-43页
    3.3 实验结果与分析第43-44页
        3.3.1 蛋白浓度标准曲线绘制第43-44页
        3.3.2 Western blot 结果第44页
    3.4 讨论第44-46页
    3.5 结论第46-47页
第四章 总结和展望第47-49页
    4.1 工作总结第47页
    4.2 展望第47-49页
致谢第49-50页
参考文献第50-54页
缩略词表第54-56页
攻硕期间的研究成果第56-57页
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