CREB磷酸化调控参与海马神经元过度兴奋神经损伤机理研究
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目的:神经元过度兴奋与癫痫、中风及部分神经退行性疾病中的神经元损伤坏死有关,会导致严重的认知和运动障碍,但是其作用机制尚未阐明。本文采用红藻氨酸(Kainic acid,KA)诱导的神经元过度兴奋模型,探讨钙调神经磷酸酶(Calcineurin,CaN)调节CREB和BAD蛋白质磷酸化对神经元功能和结构的影响。方法:建立红藻氨酸诱导的神经元过度兴奋大鼠模型,给予CaN抑制剂他克莫司(Tacrolimas,FK506)干预对比生理盐水处理的大鼠;用Morris水迷宫试验检测大鼠学习记忆能力变化情况;甲苯胺蓝染色用以观察大鼠海马神经元数量及结构变化;用蛋白质印迹(western blot)检测大鼠海马P-CREB和P-BAD蛋白的表达水平情况。结果:Morris水迷宫试验检测发现神经元过度兴奋大鼠抑制CaN活性后与对照组相比学习、空间记忆能力有明显提高。甲苯胺蓝染色可以观察到大鼠海马CA3区神经细胞缺失,给予FK506抑制CaN活性后神经细胞缺失情况有显著改善。Western blot分析发现神经元过度兴奋大鼠抑制CaN活性对比生理盐水组大鼠海马区P-CREB和P-BAD蛋白表达水平增加。结论:FK506处理可以削弱神经元过度兴奋对神经元功能和结构影响,减少大鼠海马神经元损失从而提高大鼠学习、记忆能力。FK506处理还导致大鼠海马CaN下游CREB和BAD磷酸化水平显著增加,同时伴随海马区神经细胞丢失减少,揭示CaN激活可能参与神经细胞死亡调控,在神经元过度兴奋损伤过程中起重要作用。
摘要 | 第4-5页 |
ABSTRACT | 第5页 |
第一章 绪论 | 第9-17页 |
1.1 神经元过度兴奋相关神经退行性变疾病 | 第10-11页 |
1.2 神经元过度兴奋模型 | 第11-12页 |
1.3 钙调神经磷酸酶 | 第12-13页 |
1.4 CaN 与关键蛋白磷酸化 | 第13-14页 |
1.5 CaN 抑制剂 | 第14-15页 |
1.6 研究思路 | 第15-16页 |
1.7 技术路线 | 第16-17页 |
第二章 神经元过度兴奋大鼠学习记忆能力和海马结构变化 | 第17-33页 |
2.1 材料和仪器 | 第17-20页 |
2.1.1 实验动物 | 第17-18页 |
2.1.2 实验试剂 | 第18页 |
2.1.3 实验仪器设备 | 第18-19页 |
2.1.4 主要实验溶液配制 | 第19-20页 |
2.2 实验方法 | 第20-25页 |
2.2.1 大鼠给药 | 第20-22页 |
2.2.2 大鼠Morris 水迷宫试验 | 第22-23页 |
2.2.3 大鼠灌注取材 | 第23页 |
2.2.4 冰冻切片制备 | 第23-24页 |
2.2.5 甲苯胺蓝染色 | 第24-25页 |
2.2.6 图像采集 | 第25页 |
2.2.7 统计分析 | 第25页 |
2.3 实验结果 | 第25-30页 |
2.3.1 大鼠学习记忆能力变化 | 第25-29页 |
2.3.2 大鼠海马结构的变化 | 第29-30页 |
2.4 讨论 | 第30-31页 |
2.5 结论 | 第31-33页 |
第三章 FK506 影响P-CREB 和P-BAD 在神经元过度兴奋大鼠海马中表达 | 第33-47页 |
3.1 材料和试剂 | 第33-38页 |
3.1.1 实验动物 | 第33-34页 |
3.1.2 实验试剂 | 第34-35页 |
3.1.3 实验仪器设备 | 第35-36页 |
3.1.4 主要实验溶液配制 | 第36-38页 |
3.2 实验方法 | 第38-43页 |
3.2.1 大鼠侧脑室给药 | 第38-39页 |
3.2.2 大鼠海马总蛋白提取 | 第39页 |
3.2.3 蛋白浓度测定 | 第39-40页 |
3.2.4 蛋白质SDS-PAGE 电泳 | 第40-41页 |
3.2.5 Western-blot 检测 | 第41-43页 |
3.3 实验结果与分析 | 第43-44页 |
3.3.1 蛋白浓度标准曲线绘制 | 第43-44页 |
3.3.2 Western blot 结果 | 第44页 |
3.4 讨论 | 第44-46页 |
3.5 结论 | 第46-47页 |
第四章 总结和展望 | 第47-49页 |
4.1 工作总结 | 第47页 |
4.2 展望 | 第47-49页 |
致谢 | 第49-50页 |
参考文献 | 第50-54页 |
缩略词表 | 第54-56页 |
攻硕期间的研究成果 | 第56-57页 |
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