基质金属蛋白酶-7和膜型基质金属蛋白酶-1在胃癌中的表达与胃癌临床病理特征的关系

前言 侵袭和转移是恶性肿瘤主要生物学特性之一。原位恶性肿瘤在穿越自然屏障，侵袭周围组织并发生远处转移的过程中，细胞外基质和基底膜重塑是关键环节。细胞外基质的降解主要依靠各种蛋白水解酶的表达和激活。正常情况下，细胞外基质处于不断生长和不断降解的动态平衡中。在参与细胞外基质降解的酶系中，基质金属蛋白酶(MMPs)几乎能降解细胞外基质的所有成分。肿瘤细胞能分泌大量MMPs降解细胞外基质，而且转移倾向越高的肿瘤细胞分泌的MMPs含量越高。在肿瘤细胞介导的细胞外基质降解中MMPs起关键作用。因此，MMPs在肿瘤浸润和转移过程中的作用近年来备受关注。 基质金属蛋白酶-7(MMP-7)属于基质溶解素，由于缺乏与血红素结构蛋白同源序列而成为金属蛋白酶家族的最小成员。MMP-7的作用底物范围很广，主要是基质中的蛋白多糖和糖蛋白，如明胶、蛋白聚糖、弹性蛋白、纤维连接蛋白和酪蛋白。MMP-7由肿瘤细胞产生且能活化其它MMPs成员，如激活基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)等及灭活丝氨酸蛋白酶抑制剂。MMP-7的表达由癌基因、生长因子或激素调控。MMP-7在多种肿瘤中过表达，而且和肿瘤侵袭、转移、进展相关。 膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)是MMPs家族中的一个亚家族。它是一种跨膜蛋白，存在于细胞膜上，具有降解细胞外基质的能力。它是明胶酶A的主要激活物，而明胶酶A是促进肿瘤侵袭和转移的主要基质金属蛋白酶之一。MT1-MMP在多种肿瘤组织中表达，与肿瘤的侵袭和转移相关。 目前的研究表明MMPs在多种肿瘤组织中过表达，在人类胃癌组织中MMPs的表达只有MMP-7和MT1-MMP几乎是选择性地定位于肿瘤细胞而无基质细胞着色。本研究应用免疫组织化学技术，同时检测MMP-7和MT1-MMP在胃癌组织和转移淋巴结中的表达，探讨它们与胃癌生物学行为的关系。材料和方法 一、实验材料 1.实验标本随机选取中国医科大学附属第一临床医院肿瘤外科1999年9月一2002年6月间手术切除的胃癌标本及其淋巴结60例。同时选取非癌胃粘膜组织20例作为正常对照。 2.主要试剂鼠抗人MTI一MMP单克隆抗体和兔抗人MMP一7多克隆抗体均购于福州迈新公司。sP免疫组化试剂盒和DAB显色剂均购于北京中山公司。 3.主要仪器石蜡切片机;电热恒温干燥箱;光学显微镜。 二、实验方法 1.标本分组根据大体类型从标本中筛选出早期胃癌12例，Bor.rm~1型胃癌12例，Bomnai双12型胃癌12例，Bornn田u6型胃癌12例，Bor-rmann4型胃癌12例。每个大体类型为1组，共5组。 2.用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白一过氧化酶法(SP)染色检侧MMP一7和MTI一MMP在胃癌中的表达。 3.结果判定标准以细胞浆有明显棕黄染色为阳性细胞。阴性(一):无阳性细胞;弱阳性(+):阳性细胞数低于25%;阳性(++):阳性细胞数25%一75%之间;强阳性(+++):阳性细胞数超过75%。勺 4.统计学处理用SPSS 11 .0统计分析软件对实验数据进行统计分析，统计分析方法采用xZ检验和相关性分析，P<0.05有统计学意义。实验结果 一、MMP一7和MTI一MMP在胃癌组织和淋巴结中的表达 MMP一7和MTI一MMP在非癌胃组织和无转移淋巴结中阴性表达，在阳性表达的胃癌组织和转移淋巴结中多位于癌灶边缘，癌周基质阴性表达，着色部位在胃癌细胞的胞浆中。60例胃癌组织中，MMP一7阳性率为53.33%(32/60)，MTI一MMP阳性率为68.33%(41/60)。印例淋巴结中，在无转移的28例淋巴结中MMP一7和MTI一MMP均为阴性表达。在有转移的32例淋巴结中，MMP一7阳性率为75 .00%(24/32)，MTI一MMP阳性率为84.38%(27乃2)。 二、MMP一7和MTI一MMP在胃癌组织中的表达与胃癌临床病理特征的关系 MMP一7的阳性率在发生淋巴结转移的胃癌组织中为68.75%(22/32)，在未发生淋巴结转移的胃癌组织中为35 .71%(10/28);淋巴结转移距离:淋巴结未发生转移及淋巴结转移限于第I站(蕊N:)者为39 .47%(巧乃8)，淋巴结转移至第n站和第n站以远(〕NZ)者为77.27%(17/22);淋巴结转移数:0一4个者为47.50%(19/40)，5个以上者为65.oo%(13/20);浸润深度:肿瘤侵袭至粘膜层、粘膜下层、肌层、浆膜下层(m一Ss)者为32.00%(8/25)，肿瘤穿透浆膜层(Se)者为94.29%(33乃5);组织学分型:肠型者为45.45%(10/22)，弥漫型者为57.89%(22乃8);生长方式:团块状生长者为35 .71%(10/28)，巢状、弥漫状生长者为68.75%(22/32);大体分型:局限型(B心 rr.1、2)为41 .67%(10/24)，浸润型(Borr.3、4)为75·oo%(‘8/24一MMP一7的阳性率与淋巴结转移(犷二6.55，P<0.05)、淋巴结转移距离(扩二8.00，P<0.01)、浸润深度(x，二23.35，P<0.01)、生长方式(犷二6.55，p<0.05)、大体分型(xZ=5.49，p<0.05)相关;与淋巴结转移个数(犷=1.64，P>0.05)和组织学分型(扩=0.87，P>0.05)无相关性。 MTI一MMP的阳性率在发生淋巴结转移的胃癌组织中为90.63%(29/32)，在未发生淋巴结转移的胃癌组织中为42.86%(12/28);淋巴结转移距离:淋巴结未发生转移及淋巴结转移限于第I站(感Nl)者为5