脂联素对高糖环境下人肾小球系膜细胞增殖及氧化应激水平的影响

目的体外培养人肾小球系膜细胞(HumanMesangialCells,HMCs)，通过高糖对细胞的持续作用建立HMCs的氧化应激模型，外源性加入脂联素(Adiponectin,ADPN)通过观察对高糖环境下系膜细胞增殖及氧化应激水平的影响，从而揭示脂联素在糖尿病肾病发病过程中对系膜细胞的正向保护作用机制。方法体外培养HMCs：①将HMCs随机分为正常对照组（5.5mmol/LD-葡萄糖）、高糖组（30.0mmol/LD-葡萄糖）、脂联素组（30.0mmol/LD-葡萄糖+2.5μg/mL脂联素），按上述实验分组分别于不同培养液培养24h,48h,72h，运用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定HMCs在不同实验组各时间点细胞增殖情况。②再次将HMCs随机分为三组：正常对照组（5.5mmol/L葡萄糖)）、高糖组（30.0mmol/L葡萄糖）、脂联素组（30mmol/L葡萄糖+2.5μg/mL脂联素）分别于不同培养液培养24h，48h，72h。采用硫代巴比妥酸法(TBA法)测定细胞上清液中不同实验组各时间点MDA含量，采用黄嘌呤氧化酶法测定细胞上清液中不同实验组各时间点SOD的活力，采用实时荧光定量PCR(RT-PCR法)测定不同实验组各时间点血红素加氧酶-1（hemeoxygenase-1，HO-1）mRNA的表达,通过测定上述指标观察细胞氧化应激水平的变化情况。结果①24h时间点高糖组的细胞增殖情况与正常对照组相比没有统计学差异（P＞0.05）。48h、72h两时间点与正常对照组相比高糖组细胞增殖明显受到抑制（P<0.05）。外源性加入脂联素干预后与高糖组比较促进细胞增殖，两组比较差异有统计学意义（P<0.05）；②24h、48h、72h时间点高糖组与正常组相比测得MDA含量及HO-1mRNA的表达均升高,SOD活力显著下降,差异有统计学意义（P<0.05）。外源性加入脂联素干预后与高糖组相比上述反映细胞氧化应激水平指标MDA含量降低而反映细胞抗氧化防御能力的指标SOD活力及HO-1mRNA的表达升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论随着高糖状态持续的刺激作用导致细胞的增殖受到抑制，外源性加入脂联素干预后可减轻高糖对细胞的损伤促进细胞增殖。高糖作用下可引起细胞氧化应激的发生并且超出细胞自身抗氧化防御功能，加入脂联素可降低系膜细胞氧化应激的水平，对细胞起保护作用，为临床预治糖尿病肾病发生、发展提供新思路和靶点。