左卡尼汀对高糖条件下视网膜神经细胞的保护作用

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目的原代培养新生大鼠视网膜神经细胞,建立高糖模型后,探讨左卡尼汀对高糖条件下视网膜神经细胞保护作用。方法取出生后1-3d SD)大鼠视网膜,0.25%胰蛋白酶消化制成不同大小细胞团的悬液,接种于包有多聚赖氨酸的培养瓶中培养,用倒置相差显微镜观察细胞形态变化,取义7-9天细胞进行神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫荧光鉴定。取8-10天的细胞进行试验,实验设计为5组:正常细胞培养组(对照组)、高糖模型组、高糖模型组+左卡尼汀(50μmol/L)、高糖模型组+左卡尼汀(100μmol/L)、高糖模型组+左卡尼汀(200μmol/L),用MTT法检测细胞OD值来反映视网膜神经细胞活性,以电子自旋共振法(ESR)检测各组一氧化氮(N0)及活性氧(ROS)的释放来反映氧化应激程度。结果免疫荧光显示,培养的细胞大部分抗神经元特异性烯醇化酶抗体反应阳性。MTT结果显示高糖模型细胞活性显著降低(P<0.05),左卡尼汀浓度200μmol/L,作用时间48h时对视网膜的保护作用最好。浓度200μmol/L时,对神经细胞产生毒性作用。ESR检测结果示高糖使细胞生成NO、ROS增多(p<0.01),左卡尼汀能明显抑制NO、ROS的生成。结论高糖条件下视网膜神经细胞NO、ROS生成增多;左卡尼汀能抑制高糖条件下视网膜神经细胞氧化应激反应。
摘要第2-3页
Abstract第3页
引言第6-8页
第1章 实验方法第8-11页
    1.1 细胞培养及模型制备第8页
        1.1.1 常用试剂及仪器第8页
        1.1.2 细胞培养步骤及高糖模型制备第8页
    1.2 免疫荧光鉴定第8-9页
        1.2.1 常用试剂及仪器第8-9页
        1.2.2 实验步骤第9页
    1.3 MTT法测细胞活性第9-10页
        1.3.1 常用试剂及仪器第9页
        1.3.2 常用液体配置第9页
        1.3.3 实验步骤第9-10页
    1.4 电子自旋共振(ESR)检测NO、氧自由基释放量第10-11页
        1.4.1 常用液体配置第10页
        1.4.2 常用液体配置第10页
        1.4.3 实验步骤第10-11页
第2章 实验结果第11-14页
    2.1 视网膜神经细胞原代培养及鉴定第11页
    2.2 左卡尼汀对高糖模型细胞活性各组MTT结果第11页
    2.3 各组NO、氧自由基释放量结果第11-14页
第3章 讨论第14-21页
    3.1 视网膜神经细胞原代培养及签定第14-15页
    3.2 ROS与细胞凋亡第15-18页
    3.3 左卡尼汀与线粒体释放NO与ROS第18-21页
结论第21-22页
参考文献第22-30页
附图第30-32页
综述第32-46页
    参考文献第40-46页
攻读学位期间的研究成果第46-47页
附录第47-48页
致谢第48-49页
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