一氧化氮、蛋白激酶C及缓激肽对缺血预处理后热休克蛋白的表达和延迟保护作用的实验研究及一氧化氮在慢性房颤和心衰病程中变化的临床研究

本课题从整体动物水平，对心脏缺血预处理过程中一氧化氮、蛋白激酶C和缓激肽在诱导热休克蛋白72的表达和延迟保护作用中的作用和它们之间的相互关系做了较为系统地研究，并探讨一氧化氮在慢性房颤和慢性心衰病理过程中的变化，为临床慢性房颤病人血栓形成的防治和慢性心衰使用一氧化氮供体治疗提供理论依据。 1．在体兔心脏一氧化氮通过诱导热休克蛋白72的表达打开缺血预处理的第二保护窗 观察在缺血预处理(IP)过程中，心肌NO含量的变化；抑制一氧化氮(NO)的合成对热休克蛋白表达的影响及缺血预处理第二保护窗的减少心肌梗死面积作用的影响。方法 阻断免冠状动脉5min，再灌注10min，重复4次，完成IP。在IP前5 min，静脉注射NOS抑制剂L-NAME。IP后即刻、2h、4h处死动物测量心肌NO含量。IP后24h，测定兔心肌HSP72的表达；或阻断冠状动脉30min，再灌注120min，测定心肌梗死面积。结果IP后即刻心肌NO含量较对照组升高，IP后2h即恢复正常。免疫印迹法显示IP后24h心肌HSP72表达明显高于对照组，而L-NAME阻断了这种IP诱导的HSP72的表达。IP组心梗面积明显低于对照组，经L-NAME治疗阻断了IP的减小心梗面积的作用。同时静脉注射L-精氨酸和L-NAME，抵消了L-NAME对IP诱导HSP72表达和心梗面积的影响。静脉注射NO供体SNAP，24h后诱导了HSP72的表达，减小了心梗面积。结论本研究提示IP导致一过性NO合成增加，而NO参与了IP诱导HSP72的表达和打开IP的第二保护窗。 2．蛋白激酶C在NO触发缺血预处理诱导热休克蛋白72的表达及延迟心肌保护中的作用 观察IP和SNAP预处理对PKC活性的影响及PKC在NO触发缺血预处理诱导HSP72表达及延迟心肌保护中的作用。方法IP方法同前。在IP前5min，静脉注射L-NAME和CHE(PKC抑制剂)，IP后即刻测量心肌PKC活性。IP后24h，兔心脏被快速取出测定HSP72的表达，或阻断冠状动脉30min，再灌注120min， 第＠百度大学勾士晕幢论文 测定心肌梗死面积。结果 IP后即刻心肌细胞膜 PKC活性较对照组明显升高， 而静脉注射卜MME和mE阻断了P所致的心肌细胞膜叫C活性的升高，静脉 注射SNAP亦可以导致心肌细胞膜PKC活性的升高，而这种PKC活性的升高也可 以被 CHE所阻断。IP后 24 h，IP组 HSP72蛋白表达明显高于对照组，而 L－NAME 和CHE阻断了这种IP诱导的HSP72的表达。IP组心梗面积明显低于对照组。 经 L－NAME和 CHE治疗阻断了 IP的减小心梗面积的作用。静脉注射 SNAP，24 h 后诱导了HSP72表达减小了心梗面积，而SNAP的这种作用亦可被＊E所阻断。 结论本研究提示NO通过激活PKC参与了r诱导HSP72的表达和打开IP的第 二保护窗。 3．缓激肽通过促进兔心脏 NO合成参与缺血预处理后 5’－核昔酸酶的延迟升高 和延迟的保护作用的实验研究 观察心肌局部应用缓激肽（洲）对心肌m合成的影响：在IP期间抑制邵 和mS对抡h后5’－核甘酸酶活性的影响和对缺血预处理第二保护窗的影响。 方法采用活体微透析技术，测量不同浓度的即对心肌细胞间质NO含量的影响： 在缺血预处理期间静脉注射BK受体桔抗剂和NOS抑制剂（HOm4O和L－NAM【）， IP后 24 h，提取心肌标本测量 5’－核甘酸酶活性，或阻断冠脉 30 min再灌注 120 min，测量心肌梗死面积。结果在正常心肌，透析液中加入 BK可以心肌间 质 NO浓度升高。IP 24 h后，心肌细胞膜和胞浆 5’－核甘酸酶活性均较对照 组明显升高。静脉注射 HOE－140和 L－NAME阻断了 IP所致的细胞膜和胞浆 5’－ 核甘酸酶活性的升高。lP组。C梗面积明显小于对照组，而HOE－140和 L－NAME 阻断了这种保护作用。静脉注射 BK后 24h，心肌细胞膜和胞浆 5’－核甘酸酶 活性均较对照组明显升高，心梗面积明显小于对照组；而L－NAME阻断了BK对 5’－核甘酸酶活性和心梗面积的影响。结论 BK通过促进 NO合成参与了 IP所致 的5’－核甘酸酶活性的延迟升高和延迟的保护作用。 4．慢性房颤病人血浆NO水平变化的临床研究 观察慢性房颤（AF）病人血浆 NO含量、卜选择素（P－S）水平及纤溶活性 的改变。方法测量15例慢性AF病人和15例性别、年龄相匹配的窦性心率对 照组病人的血浆亚硝酸根及硝酸根离子（NO）水平、P－选择素（P－S）及血浆 纤溶酶原激活剂抑制物－1（PA）和纤维蛋白原（F i b）的变化。结果 AF病人 3 第一宫区大亏蹲亡学幢论支 血浆NOX－水平明显低于对照组：相反，AF病人血浆P－S和叩I－1水平明显高于 对照组。两组病人血浆Fib无明显差异。结论AF病人血浆NO水平低下、血小 板激活?