吡咯喹啉醌对体外培养的神经干细胞增殖和凋亡的影响

吡咯喹啉醌论文 神经干细胞论文 增殖论文 凋亡论文
论文详情
神经退行性疾病(Neurodegenerative disease)是指中枢神经系统组织非正常退变引起的功能缺陷与衰退的一类疾病,病理上表现为脑和脊髓发生神经元变性、丢失。研究发现,机体内过量的自由基产生导致的氧化应激损伤在神经退行性疾病的发病过程中起着重要的作用。近年来,神经干细胞(Neural Stem Cells, NSCs)因其具有自我更新的能力和多向分化潜能,在中枢神经系统再生和重建方面引起广泛关注,但NSCs移植后存活率低和易于受到氧化应激损伤的缺陷,则成为其应用在神经退行性疾病临床治疗上的限制。吡咯喹啉醌(Pyrroloquinline quinone, PQQ)在自然界中广泛存在,作为氧化还原酶的辅基参与机体内的多种氧化还原反应,具有多种生物学功能,尤其是其强大的清除自由基能力和神经营养保护功能已经引起人们的注意。本文首先通过体外悬浮方式培养NSCs,同时采用H2O2和Glu造成细胞氧化应激,以构建NSCs药物损伤模型。结果表明,二者均能对NSCs产生毒性作用,其毒性作用呈时间依赖和浓度依赖;据此,本文分别采用0.35mM H2O2作用细胞24h建立体外NSCs直接氧化应激模型,15mMGlu作用细胞48h建立间接氧化应激损伤模型。其次利用CCK-8试剂盒、免疫荧光染色等方法考察PQQ对NSCs自发的增殖、凋亡和分化的影响。结果显示,一定浓度(0.003-3μM) PQQ对NSCs的生长具有促进作用,并存在着浓度依赖,但高浓度的PQQ(30gM或以上)对NSCs的增殖反而有抑制作用,PQQ对NSCs的自发性凋亡和分化均无显著性影响。通过建立的损伤模型,采用Hoechst33258-PI荧光染色、AV-PI双染检测凋亡以及检测细胞内酶活性等方法,考察PQQ的预处理和后处理对NSCs的神经保护作用。结果表明,在药物诱导之前预加PQQ能够明显提高细胞存活率,并存在浓度-效应关系,而PQQ后处理则无明显效果。PQQ预处理组细胞的形态上的染色质浓集或碎块现象减少,并且活细胞增多,折光度增强,状态明显出现好转;其早期/晚期凋亡细胞的比率均有所减少。对胞内抗氧化酶活力水平检测发现,PQQ的预处理能够显著提高SOD和CAT的活性,但GSH-Px的变化则不明显。说明PQQ对NSCs的氧化应激损伤具有保护作用,并且可能是通过提高胞内抗氧化酶的活力来实现的。总之,本研究结果表明,PQQ对体外培养的NSCs具有促增殖的作用,PQQ预处理对氧化应激导致的NSCs损伤具有明显的保护作用,为神经退行性疾病的治疗提供了新的手段。
摘要第4-5页
Abstract第5-6页
引言第10-11页
1 文献综述第11-25页
    1.1 神经干细胞第11-16页
        1.1.1 NSCs的定义第11页
        1.1.2 NSCs的生物学特征第11-13页
        1.1.3 NSCs的标记与鉴定第13-14页
        1.1.4 NSCs的培养第14-15页
        1.1.5 NSCs的应用前景第15-16页
    1.2 PQQ的研究现状第16-21页
        1.2.1 PQQ的发现第16-17页
        1.2.2 PQQ的自然分布第17页
        1.2.3 PQQ的生物学功能第17-21页
    1.3 氧化应激第21-24页
        1.3.1 氧化应激的概念第21页
        1.3.2 自由基的产生和清除第21-22页
        1.3.3 氧化应激与神经退行性疾病第22-23页
        1.3.4 氧化应激与细胞凋亡第23-24页
    1.4 小结第24-25页
2 NSCs的原代分离培养及毒素损伤模型的建立第25-38页
    2.1 实验材料第25-29页
        2.1.1 实验动物第25页
        2.1.2 实验药品第25-26页
        2.1.3 实验仪器第26-27页
        2.1.4 溶液配制第27-29页
    2.2 实验方法第29-33页
        2.2.1 NSCs的原代取材及培养第29-30页
        2.2.2 NSCs的继代培养第30页
        2.2.3 NSCs生长曲线的测定第30-31页
        2.2.4 NSCs的鉴定第31-32页
        2.2.5 细胞存活率的检测第32页
        2.2.6 半数致死浓度(LC_(50))的计算第32-33页
        2.2.7 统计分析第33页
    2.3 实验结果与讨论第33-37页
        2.3.1 NSCs的原代及继代培养第33-34页
        2.3.2 NSCs的生长曲线第34-35页
        2.3.3 NSCs的免疫组织化学鉴定第35-36页
        2.3.4 H_2O_2对NSCs细胞存活率的影响第36页
        2.3.5 Glu对NSCs细胞存活率的影响第36-37页
    2.4 本章小结第37-38页
3 PQQ对NSCs自身增殖、凋亡及分化的影响第38-47页
    3.1 实验材料及方法第38-39页
        3.1.1 实验材料第38页
        3.1.2 实验仪器第38-39页
        3.1.3 溶液配置第39页
    3.2 实验方法第39-41页
        3.2.1 细胞存活率的检测第39页
        3.2.2 细胞生长曲线的测定第39-40页
        3.2.3 Hoechst33258染色第40页
        3.2.4 细胞凋亡率的计算第40页
        3.2.5 细胞分化潜能的测定第40页
        3.2.6 统计分析第40-41页
    3.3 实验结果与讨论第41-45页
        3.3.1 PQQ对NSCs存活率的影响第41-42页
        3.3.2 PQQ对NSCs生长曲线的影响第42-43页
        3.3.3 PQQ对NSCs自发性凋亡的影响第43页
        3.3.4 PQQ对NSCs生长及分化能力的影响第43-45页
    3.4 本章小结第45-47页
4 PQQ对体外培养NSCs损伤的保护作用第47-60页
    4.1 实验材料第47-48页
        4.1.1 实验药品及试剂第47页
        4.1.2 溶液配制第47-48页
        4.1.3 实验仪器第48页
    4.2 实验方法第48-51页
        4.2.1 CCK-8法测定细胞活率第48-49页
        4.2.2 Hoechst33258-PI荧光染色观察细胞形态变化第49页
        4.2.3 Annexin V-FITC和PI双染色分析细胞凋亡第49-50页
        4.2.4 SOD的检测第50-51页
        4.2.5 CAT的检测第51页
        4.2.6 GSH-Px的检测第51页
        4.2.7 统计分析第51页
    4.3 实验结果与讨论第51-59页
        4.3.1 PQQ后添加对损伤的NSCs存活率的影响第52-53页
        4.3.2 PQQ预处理对损伤的NSCs存活率的影响第53-54页
        4.3.3 PQQ对损伤NSCs的保护作用第54-57页
        4.3.4 PQQ对损伤NSCs凋亡和坏死的影响第57-58页
        4.3.5 PQQ对损伤NSCs内抗氧化酶活性变化的影响第58-59页
    4.4 本章小结第59-60页
结论第60-61页
创新点摘要第61-62页
参考文献第62-69页
攻读硕士学位期间发表学术论文情况第69-70页
致谢第70-71页
论文购买
论文编号ABS604931,这篇论文共71页
会员购买按0.30元/页下载,共需支付21.3
不是会员,注册会员
会员更优惠充值送钱
直接购买按0.5元/页下载,共需要支付35.5
只需这篇论文,无需注册!
直接网上支付,方便快捷!
相关论文

点击收藏 | 在线购卡 | 站内搜索 | 网站地图
版权所有 艾博士论文 Copyright(C) All Rights Reserved
版权申明:本文摘要目录由会员***投稿,艾博士论文编辑,如作者需要删除论文目录请通过QQ告知我们,承诺24小时内删除。
联系方式: QQ:277865656