第一部分糖尿病大鼠氧化应激状况及醛糖还原酶变化的实验研究目的:揭示糖尿病微血管病变时血液中醛糖还原酶（AR）活性的变化和氧化应激产物超氧阴离子（O2-·）以及抗氧化物质:超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的活性变化,阐明血管微环境中抗氧化物质生物化学异常改变过程,明确AR活性变化与高血糖、氧化应激之间的关系。方法:选择健康成年雄性SD大鼠120只,随机抽取15只为正常对照组,其余饲以高糖高脂饲料,腹腔注射链脲佐菌素（STZ）诱发为2型糖尿病模型,以血糖＞13.8为造模成功,又在其中抽取15只（血糖:13.8～16.7mol/L）者为糖尿病组L,随机抽取15只（血糖＞16.7mol/L）为糖尿病组H。取各组大鼠血液,离心,采用NADPH减少法测定血清中的AR的活性,采用紫外分光光度法及化学比色法测定血清中的O2-·、SOD、CAT活性。结果:①实验性糖尿病L组及H组分别与正常对照组比较:L组O2-·活性（95.87±24.58U/ml）显著低于正常对照组O2-·活性（65.94±11.38U/ml）（P＜0.05）,H组O2-·活性（105.43±22.86U/mk）显著低于正常对照组（P＜0.05）。L组与H组比较:差异无统计学意义（P＞0.05）②实验性糖尿病L组及H组分别与正常对照组比较:L组SOD活性（23.65±7.62U/ml）显著低于正常对照组SOD活性（38.93±12.01U/ml）（P＜0.05）,H组SOD活性（16.41±6.82U/ml）显著低于正常对照组（P＜0.05）。L组与H组比较:H组SOD活性显著低于L组（P＜0.05）③实验性糖尿病L组及H组血清AR活性分别与正常对照组比较:L组AR活性（4.16±0.96U/ml）显著高于正常对照组AR活性（2.44+1.27U/ml）（P＜0.05）,H组的血清AR活性（4.44+1.05U/ml）显著高于正常对照组（P＜0.05）,L组与H组比较:差异无统计学意义（P＞0.05）。④实验性糖尿病L组及H组分别与正常对照组比较:L组血清CAT活性（8.10±1.04U/ml）与正常对照组CAT活性（9.14±1.62U/ml）差异无统计学意义,H组血清CAT活性（9.10±1.04U/ml）与正常对照组CAT活性（9.14±1.62U/ml）差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:①氧化应激产物O2-··活力糖尿病组L和糖尿病组H均有增高,以糖尿病组H更为显著,但与糖尿病组L比较无统计学差异。表明糖尿病微血管病变时,氧化应激增强,但O2-··活力没有血糖浓度依赖性。②抗氧化物酶SOD活力糖尿病组L和糖尿病组H较正常对照组均有下降,表明糖尿病微血管病变时高血糖为诱导体内活性氧族（ROS）的主导因素。糖尿病组L与糖尿病组H相比较有显著性差异,表明SOD活性改变有血糖浓度依赖性。③糖尿病组L和糖尿病组H AR活力较正常对照组均增加,表明糖尿病微血管病变时,随着氧化与抗氧化系统的变化,AR也发生变化。糖尿病微血管病变与O2-·、SOD、AR氧化应激物质密切相关,其中以SOD的活性改变最为显著,可能是氧化抗氧化失横导致并发症发生的关键因素。糖尿病组L与糖尿病组H相比较没有显著性差异,表明AR活力改变没有血糖浓度依赖性。④抗氧化物酶CAT活力糖尿病组L和糖尿病组H相比较无显著性差异,可能存在实验误差。第二部分2型糖尿病患者氧化应激状况及醛糖还原酶变化的临床研究目的:揭示2型糖尿病及合并微血管病变、脑卒中患者血液中醛糖还原酶（AR）活性的变化和氧化应激产物超氧阴离子（O2-）、过氧化氢（H2O2）以及抗氧化物质还原型骨胱甘肽（GSH）、过氧化氢酶（CAT）的活性变化,阐明2型糖尿病患者微血管病变及神经组织损伤时氧化及抗氧化物质生物化学改变过程,探讨AR活性变化与氧化应激、氧化应激与糖尿病慢性并发症之间的关系,并通过这些研究进一步阐述2型糖尿病慢性并发症的发病机制。方法:选取昆明医学院第二附属医院干疗三科糖尿病住院患者及该院体检科正常人（2008年12月-2009年5月）共240例,根据有无并发症分组:糖尿病无并发症组（DM）,糖尿病合并微血管并发症组（DC）,糖尿病发生脑卒中组（DS）和正常对照组组（CO）各60例,男女随机选取,年龄为40-80岁。糖尿病诊断依据ADA诊断标准,合并微血管并发症患者依据临床症状及实验室检查结果确诊,DC组入选病例主要包括糖尿病肾病、视网膜病变两类,脑卒中糖尿病患者做CT和磁共振进行脑组织形态学观察。所有入选病例记录年龄、性别、糖尿病病程、体重指数（BMI）、空腹血糖（FBG）、甘油三脂（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）。所有人群均排除自身免疫性疾病和炎症性疾病,CO组选取为体检正常人,排除心脑血管、糖尿病等疾病。采用NADPH减少法测定AR的活性,采用紫外分光光度法及化学比色法测定血清中的O2-·、H2O2、CAT活性,酶联免疫吸附法测定GSH含量。结果:①一般情况:各组间年龄、性别、体重指数、糖尿病病程、FBG无统计学差异（P＞0.05）;血清TG、LDL含量,糖尿病三组均高于CO组,但无明显统计学意义,（P＞0.05）,糖尿病三组组间比较亦无统计学差异（P＞0.05）;血清HDL含量,糖尿病三组均低于正常CO组,但无明显统计学意义（P＞0.05）,糖尿病三组组间比较亦无统计学差异（P＞0.05）。②各组AR活性比较:糖尿病三组AR活性均高于CO组（1.44±0.14）,有显著性差异（P＜0.05）;DC组AR活性（4.35±0.49）和DS组（4.63±0.71）明显高于DM组（3.72±0.46）,有明显统计学差异（P＜0.05）,但DC和DS两组比较无统计学差异,P＞0.05。③各组O2-活性比较:糖尿病三组O2-活性均高于CO组（62.86±3.27）,有显著性差异（P＜0.05）;DC组O2-活性（98.27±12.80）和DS组O2-活性（96.85±7.46）明显高于DM组（86.44±7.72）,有明显统计学差异（P＜0.05）,但DC和DS两组比较无统计学差异,P＞0.05。④各组H2O2含量比较:糖尿病三组H2O2含量均高于CO组（62.86±3.27）,有显著性差异（P＜0.05）;DC组H2O2含量（91.49±9.49）和DS组（111.25±17.94）明显高于DM组（79.67±5.70）,有明显统计学差异（P＜0.05）,但DC和DS两组比较无统计学差异,P＞0.05。⑤各组CAT活性比较:DC、DS糖尿病两组CAT活性均低于CO组（10.16±0.94）,有显著性差异（P＜0.05）;DM组CAT活性（9.49±0.75）不明显低于CO组,无统计学差异（P＞0.05）;DC组CAT活性（6.74±0.76）和DS组CAT活性（6.18±1.46）明显低于DM组（9.49±0.75）,有明显统计学差异（P＜0.05）,但DC和DS两组比较无统计学差异,P＞0.05。⑥各组GSH含量比较:糖尿病三组GSH含量均低于CO组（301.72±28.71）有显著性差异（P＜0.05）;DM组GSH含量（168.93±46.80）、DC组（78.40±13.89）、DS组（50.08±17.96）逐渐减少,各组间比较均有明显统计学差异（P＜0.05）。结论:①氧化应激产物H2O2、O2-含量糖尿病三组均有增高,且DC、DS组均明显高于DM组。表明当糖尿病存在微血管病变及神经组织损伤时,氧化应激增强,H2O2活力增高,O2-产生更多,自由基对机体损害更大,这种变化在糖尿病合并微血管病变及神经组织损伤时更为明显。②抗氧化作用的GSH含量,糖尿病三组明显低于CO组,其中DM＞DC＞DS,DS组含量最低。表明糖尿病患者在机体高糖状态下,氧化应激的作用增强,氧化与抗氧化平衡被打破,自由基产生增多的同时,抗氧化物质消耗过多,抗氧化作用下降,在合并有糖尿病慢性并发症时含量更低。③CAT活性,DC、DS两组均低于CO组以DS组更低,但DM组虽然低下,但没有统计学的差异。表明当发生氧化应激时,随着病程的延长和并发症的发生,抗氧化作用越来越弱,这种变化在糖尿病合并微血管和神经组织损伤时更为明显,也证实了氧化应激对糖尿病慢性并发症的影响。④糖尿病三组AR活性较正常CO组均增加,以DC和DS两组增加显著。表明在高糖状态下,氧化与抗氧化系统发生变化,AR也随之变化,AR与糖尿病微血管病变及神经组织损伤密切相关。AR在糖尿病微血管病变及神经组织损伤病变发生时,与体内氧化物质O2-、H2O2等及抗氧化物质CAT、GSH等变化密切相关,表明AR与糖尿病氧化应激密切相关。⑤氧化应激时,自由基产生增多,抗氧化能力下降,氧化与抗氧化平衡被打破,导致糖尿病微血管并发症及神经组织损伤的发生,氧化应激在糖尿病上述并发症的发生过程中起重要作用。
