野油菜黄单胞菌中一个推测的sigma因子基因的突变及其表型分析

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σ因子是原核生物RNA聚合酶的一个亚基,是原核基因表达的主要调节因子。细菌利用不同的σ因子控制不同的基因的转录,其中包括与致病相关的基因。野油菜黄单胞菌野油菜致病变种8004菌株(Xcc 8004)基因组测序和注释工作已经完成。在该基因组中,根据注释结果,Xcc 8004中共有13个编码σ因子的ORF,其中XC1143编码的一个σ70因子。为了研究该σ因子在Xcc中的作用,我们构建了该基因的Tn5gusA5的插入突变体和pK18mob定点整合突变体并进行了表型分析。该突变体在丰富培养基和基本培养基上的生长状况与野生型没有明显差别,胞外蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶的活性也与野生型的一致。这些结果表明,该σ因子与Xcc的生长以及主要胞外酶的产生无关。在寄主植物满身红箩卜上检测了突变体的致病性,该基因的Tn5gusA5插入突变体O69H01致病力下降明显,241C03下降不明显。进一步的定点整合突变体致病性实验结果与野生型是一致的,这表明该基因与Xcc致病性是无关的。
第一章 前言第7-15页
    1.1 野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris pv. campestris)概述第7页
    1.2 植物病原菌致病机理第7-8页
    1.3 植物病原菌致病毒性决定因子第8-9页
        1.3.1 多糖第8页
        1.3.2 胞外酶第8-9页
        1.3.3 依赖于hrp基因的效应蛋白分子第9页
        1.3.4 毒素第9页
    1.4 病原菌致病因子的调控第9-10页
        1.4.1 双组分调控系统第9-10页
        1.4.2 σ因子第10页
        1.4.3 群体感应系统对毒性因子的调控第10页
    1.5 σ因子第10-13页
        1.5.1 σ因子概述第10-11页
        1.5.2 σ因子的基本结构第11-12页
        1.5.3 σ因子的分类第12-13页
        1.5.4 抗σ因子第13页
    1.6 σ因子与致病性之间的关系第13-14页
    1.7 本研究工作的目的和意义第14-15页
第二章 材料与方法第15-26页
    2.1 材料第15-18页
        2.1.1 菌株与质粒第15-16页
        2.1.2 培养基及培养条件第16-17页
        2.1.3 抗生素第17页
        2.1.4 常用溶液及缓冲液第17-18页
    2.2 方法第18-26页
        2.2.1 快速碱裂解法少量提取质粒DNA第18-19页
        2.2.2 Xcc总DNA的提取第19页
        2.2.3 常规PCR第19-20页
        2.2.4 DNA的酶切、电泳及DNA片段浓度、大小测算第20-22页
        2.2.5 质粒DNA的电脉冲转化第22-23页
        2.2.6 胞外酶的检测第23-24页
        2.2.7 致病性试验第24页
        2.2.8 细菌在培养基中的生长繁殖曲线的绘制第24页
        2.2.9 整合突变体的构建第24-25页
        2.2.10 整合突变体的验证第25-26页
第三章 实验结果第26-36页
    3.1 XC1143的Tn5gusA5转座子插入突变体的构建及致病力检测第26-27页
    3.2 XC1143整合突变体的构建第27-29页
        3.2.1 用聚合酶链式反应(PCR)方法扩增DNA片段并回收第27页
        3.2.2 整合片段的克隆第27-28页
        3.2.3 三亲本接合第28页
        3.2.4 整合突变体的PCR鉴定第28-29页
    3.3 整合突变体致病力检测第29-30页
    3.4 整合突变体生化表性检测第30-31页
        3.4.1 胞外蛋白酶第30页
        3.4.2 胞外纤维素酶第30页
        3.4.3 胞外淀粉酶第30-31页
    3.5 突变体在不同培养基上的生长状况第31-33页
        3.5.1 突变体在基本培养基上的生长第31-32页
        3.5.2 整合突变体的生长曲线第32-33页
    3.6 XC1143的核苷酸序列及其编码产物的推测第33-36页
        3.6.1 XC1143全长573bp,其核苷酸序列及所编码的氨基酸第33-34页
        3.6.2 通过ncbi中的blast搜索,结果表明其编码产物与两种σ因子均有38%的同源性第34-36页
第四章 讨论与分析第36-38页
    4.1 Xcc 8004中的σ因子与注释功能第36页
    4.2 XC1143的功能预测第36-37页
    4.3 结果分析第37页
    4.4 下一步工作设想第37-38页
参考文献第38-44页
致谢第44页
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