AP ghrelin对顺铂处理大鼠胃运动的影响及下丘脑外侧区的调控

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Ghrelin,一种胃内产生的多肽,包含28个氨基酸,在中枢、外周均有表达。因其具有促进消化、促进生长激素释放、调节代谢和能量平衡等多种生物活性而逐渐引起了国内外学者的关注。近年来,我们在中枢内ghrelin神经通路及其对胃肠运动功能的调控方面做了大量工作,但ghrelin与胃肠功能紊乱的关系,研究较少。因此,本课题建立顺铂致大鼠呕吐模型,探讨极后区(area postrema,AP)微量注射ghrelin对顺铂处理大鼠胃运动的影响及下丘脑外侧区(lateral hypothalamic area,LHA)的调控作用。主要内容及结果如下:1.采用免疫组化法检测了大鼠胃组织ghrelin和GHSR-1a的表达,结果显示大鼠胃内可见ghrelin及GHSR-1a阳性细胞,顺铂处理大鼠ghrelin的表达减少,GHSR-1a的表达增多。分别采用ELISA、Western blot和PCR法检测并记录了大鼠ghrelin及其受体GHSR-1a在血浆及胃内的变化,结果显示:与NS组相比,顺铂处理大鼠的血浆ghrelin浓度有轻微下降,但无统计学意义(P>0.05);胃匀浆ghrelin浓度有明显下降(P<0.05)。顺铂处理大鼠胃内ghrelin在蛋白及mRNA水平的表达与NS组相比均有所降低,但无统计学意义(P>0.05);胃内GHSR-1a在蛋白及mRNA水平的表达有所升高(P<0.05)。2.采用神经元逆行追踪结合荧光免疫组化法观察了LHA-AP之间ghrelin神经通路的构成及顺铂对该通路的影响,结果显示:LHA-AP之间存在ghrelin神经通路,顺铂使该通路上ghrelin神经元的投射减少。采用Western blot和PCR法测定了大鼠AP及LHA内ghrelin与GHSR-1a表达的变化,结果显示:与NS组相比,顺铂处理大鼠AP及LHA内ghrelin在蛋白及mRNA水平的表达均明显降低(P<0.05);GHSR-1a在蛋白及mRNA水平的表达均显著升高(P<0.05-0.01)。3.采用核团微量注射、N-甲基-D-天冬氨酸(N-Methyl-D-aspartic acid,NMDA)兴奋LHA、核团电损毁、胃运动记录及细胞外放电记录等方法,观察AP ghrelin及LHA兴奋对顺铂处理大鼠胃运动的影响,结果显示:大鼠AP内可记录到GD敏感神经元,AP微量注射ghrelin后GD神经元的放电频率显著增加(P<0.01),预先给予[D-Lys-3]-GHRP-6可完全阻断该作用。NMDA兴奋LHA后,AP内被ghrelin兴奋的GD神经元放电频率显著增加(P<0.01),AP预先注射[D-Lys-3]-GHRP-6能够部分阻断此作用。顺铂会减弱大鼠胃运动(P<0.01)。AP内微量注射ghrelin可使胃运动的幅度和频率增加(P<0.05-0.01),AP预先注射[D-Lys-3]-GHRP-6可完全阻断此作用。NMDA兴奋LHA可使大鼠胃运动幅度和频率增加(P<0.01),AP预先注射[D-Lys-3]-GHRP-6可部分阻断此作用。电损毁AP可以削弱LHA兴奋对胃运动的促进作用。顺铂组大鼠的兴奋作用均弱于NS组大鼠(P<0.05)。综上,本课题结果证实AP ghrelin能够促进大鼠胃运动,LHA-AP之间存在ghrelin神经通路,且该通路能够参与胃运动的调控。顺铂能够减弱这种调控作用,这可能是由于顺铂使得LHA内ghrelin的表达及LHA-AP之间的ghrelin纤维投射减少所导致的。以上结果可为发现ghrelin作为新的抗呕吐药物靶点提供参考。
摘要第3-5页
abstract第5-6页
符号说明第13-14页
前言第14-16页
第一章 综述第16-32页
    1.1 呕吐第16-22页
        1.1.1 呕吐简介第16页
        1.1.2 止吐药现状与止吐治疗第16-18页
            1.1.2.1 多巴胺受体拮抗剂预防、治疗呕吐第17页
            1.1.2.2 5-HT3受体拮抗剂预防、治疗呕吐第17页
            1.1.2.3 NK-1受体拮抗剂预防、治疗呕吐第17页
            1.1.2.4 其他第17-18页
        1.1.3 肿瘤化疗所致恶心呕吐第18-21页
            1.1.3.1 CINV的生理性第18-20页
            1.1.3.2 CINV的治疗第20-21页
            1.1.3.3 肿瘤化疗常用药物——顺铂第21页
        1.1.4 呕吐模型第21-22页
    1.2 Ghrelin第22-27页
        1.2.1 Ghrelin及其分布第22页
        1.2.2 Ghrelin受体及其分布第22-23页
        1.2.3 Ghrelin功能与作用第23-26页
            1.2.3.1 Ghrelin对小鼠认知功能的影响第23页
            1.2.3.2 Ghrelin促进生长激素GH释放第23页
            1.2.3.3 Ghrelin与学习和记忆功能第23页
            1.2.3.4 Ghrelin与睡眠第23-24页
            1.2.3.5 Ghrelin与焦虑和应激第24页
            1.2.3.6 Ghrelin与神经保护第24页
            1.2.3.7 Ghrelin与代谢综合征第24页
            1.2.3.8 Ghrelin与肥胖症第24页
            1.2.3.9 Ghrelin与糖代谢第24-25页
            1.2.3.10 Ghrelin与高血压第25页
            1.2.3.11 Ghrelin与免疫调节第25页
            1.2.3.12 Ghrelin通过JNK信号通路抑制LPS诱导的肺泡巨噬细胞凋亡第25页
            1.2.3.13 Ghrelin与衰老第25-26页
            1.2.3.14 Ghrelin对胃肠运动的影响第26页
        1.2.4 其他神经肽第26-27页
    1.3 脑内核团第27-30页
        1.3.1 下丘脑外侧区LHA第27-29页
        1.3.2 极后区AP第29页
        1.3.3 孤束核NTS第29页
        1.3.4 迷走神经背核DMV第29-30页
        1.3.5 其他核团第30页
    1.4 Ghrelin与呕吐第30-32页
第二章 顺铂对大鼠ghrelin和ghrelin受体GHSR-1a的影响第32-46页
    2.1 实验材料准备第32-33页
        2.1.1 材料与试剂第32-33页
        2.1.2 设备与仪器第33页
    2.2 实验方法及过程第33-38页
        2.2.1 溶液配制第33-34页
        2.2.2 高岭土饲料的制备第34页
        2.2.3 顺铂致呕吐模型的构建第34页
        2.2.4 摄食、体重及高岭土记录第34页
        2.2.5 标本采集与处理第34-35页
        2.2.6 ELISA法测定血浆和胃匀浆ghrelin浓度第35-36页
        2.2.7 胃组织ghrelin和GHSR-1a的表达第36-38页
            2.2.7.1 免疫组化测定蛋白表达第36-37页
            2.2.7.2 Westernblot测定蛋白表达第37页
            2.2.7.3 PCR测定mRNA表达第37-38页
        2.2.8 统计学处理第38页
    2.3 实验结果第38-44页
        2.3.1 顺铂对大鼠摄食、体重及高岭土摄入量的影响第38-40页
        2.3.2 顺铂对大鼠血浆、胃匀浆ghrelin浓度的影响第40-41页
        2.3.3 顺铂对大鼠胃组织ghrelin和GHSR-1a表达的影响第41-44页
            2.3.3.1 顺铂对大鼠胃组织ghrelin和GHSR-1a蛋白表达的影响第41-43页
            2.3.3.2 顺铂对大鼠胃组织ghrelin和GHS-R1amRNA表达的影响第43-44页
    2.4 本章讨论与小结第44-46页
第三章 LHA-APghrelin神经通路及顺铂对该通路的影响第46-58页
    3.1 实验材料准备第46-47页
        3.1.1 材料与试剂第46-47页
        3.1.2 设备与仪器第47页
    3.2 实验方法及过程第47-50页
        3.2.1 溶液配制第47页
        3.2.2 顺铂致呕吐模型的构建第47页
        3.2.3 LHA至APghrelin神经元的投射第47-50页
            3.2.3.1 AP注射荧光金第47-48页
            3.2.3.2 灌注固定第48-49页
            3.2.3.3 冰冻切片第49-50页
            3.2.3.4 荧光免疫组化第50页
        3.2.4 组织学检查第50页
        3.2.5 Westernblot第50页
        3.2.6 PCR第50页
        3.2.7 统计学处理第50页
    3.3 实验结果第50-55页
        3.3.1 LHA-APghrelin神经通路构成第50-51页
        3.3.2 顺铂对LHA-APghrelin神经通路的影响第51-55页
            3.3.2.1 顺铂对LHA和APghrelin与GHSR-1a蛋白表达的影响第51-52页
            3.3.2.2 顺铂对LHA和APghrelin与GHSR-1amRNA表达的影响第52-53页
            3.3.2.3 顺铂对LHA-APghrelin神经元投射的影响第53-55页
    3.4 本章讨论与小结第55-58页
第四章 APghrelin对顺铂处理大鼠胃扩张敏感神经元放电活动的影响及LHA的调控作用第58-74页
    4.1 实验材料准备第58-59页
        4.1.1 材料与试剂第58页
        4.1.2 设备与仪器第58-59页
    4.2 实验方法及过程第59-62页
        4.2.1 溶液配制第59页
        4.2.2 顺铂致呕吐模型的构建第59-60页
        4.2.3 电生理第60-62页
            4.2.3.1 胃部植入扩张球囊第60页
            4.2.3.2 LHA埋管第60-61页
            4.2.3.3 APGD神经元放电记录第61-62页
        4.2.4 组织学检查第62页
        4.2.5 统计学处理第62页
    4.3 实验结果第62-70页
        4.3.1 AP注射ghrelin对顺铂处理大鼠GD神经元的影响第62-67页
        4.3.2 NMDA兴奋LHA对顺铂处理大鼠GD神经元的影响第67-70页
    4.4 本章讨论与小结第70-74页
第五章 AP ghrelin对顺铂处理大鼠胃运动的影响及LHA的调控作用第74-104页
    5.1 实验材料准备第74-75页
        5.1.1 材料与试剂第74页
        5.1.2 设备与仪器第74-75页
    5.2 实验方法及过程第75-79页
        5.2.1 溶液配制第75页
        5.2.2 顺铂致呕吐模型的构建第75页
        5.2.3 实验分组第75-76页
        5.2.4 胃部置入应变片第76-77页
        5.2.5 LHA和AP埋管第77页
        5.2.6 胃运动记录第77-78页
        5.2.7 AP微量注射ghrelin第78页
        5.2.8 NMDA兴奋LHA第78页
        5.2.9 电损毁AP第78页
        5.2.10 组织学检查第78-79页
        5.2.11 统计学处理第79页
    5.3 实验结果第79-102页
        5.3.1 顺铂对大鼠胃运动的影响第79-80页
        5.3.2 APghrelin对顺铂处理大鼠胃运动的影响第80-87页
        5.3.4 NMDA兴奋LHA对顺铂处理大鼠胃运动的影响第87-94页
        5.3.5 电损毁AP对顺铂处理大鼠胃运动的影响第94-102页
    5.4 本章讨论与小结第102-104页
结论第104-106页
参考文献第106-114页
致谢第114-116页
攻读硕士学位期间发表的学术论文目录第116-117页
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论文编号ABS4122536,这篇论文共117页
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