力竭运动致大鼠慢性肾损伤机制及促红细胞生成素干预研究

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目的:探讨力竭运动致大鼠慢性肾损伤机制及促红细胞生成素干预研究。方法:采用反复四周力竭运动建立大鼠慢性肾损伤模型,用人重组促红细胞生成素(rhEPO)对此模型进行干预。光学显微镜HE染色观察肾组织病理改变;电镜检测肾组织超微结构;TUNEL检测肾细胞凋亡;用分子生物化学法检测大鼠血清尿素氮、MDA、SOD、NO、NOS、Hb含量、RBC计数、尿蛋白含量;免疫组化、荧光标记和Western blotting检测肾组织EPO/EPOR、Caspase-3、Bcl-xl、NF-κB、TGF-B1、a-SMA、JAK2、Akt的蛋白表达。结果:1.反复4周大强度力竭运动后大鼠体重、跑距、血清、Hb显著性下降(P<0.05),血清BUN、尿蛋白含量显著性增高(P<0.05),肾组织结构及超微结构明显病理改变。2.反复四周力竭运动致慢性肾损伤后大鼠肾皮髓区的EPO和EPOR表达增强,与对照组比较,有统计学意义(P<0.05)。3.应用rhEPO后,力竭大鼠一般状况明显改善,跑距明显延长,与对照组相比,血BUN及尿蛋白均明显降低(P<0.05),肾组织凋亡细胞明显减少(P<0.05),肾组织超微结构、病理损伤明显改善。4.与正常对照组比较,rhEPO可明显升高NO、NOS活性及Bcl-xl、JAK2、Akt蛋白表达(P<0.05),显著拮抗NF-κB、TGF-B1、a-SMA、Caspase-3表达(P<0.05)。结论:1.反复4周大强度力竭运动可致大鼠慢性肾损伤。2.反复4周力竭运动后,肾组织EPO/EPOR蛋白表达增加,提示内源性EPO/EPOR参与慢性肾损伤的内在修复机制。3. rhEPO能减轻力竭运动致大鼠慢性肾组织病理损伤和改善肾功能的同时,明显提高大鼠的体能及运动能力。考虑rhEPO可通过抗氧化应激反应,升高NO、NOS活性,拮抗炎性核因子NF-κB表达,拮抗致纤维化因子TGF-B1、a-SMA表达和(或)减少肾组织细胞的凋亡而减轻力竭运动致慢性肾损伤。4. rhEPO可以明显减少慢性肾损伤后凋亡细胞数量,可能与增加Bcl-xl、降低Caspase-3的表达而起到抗凋亡的作用。可能通过PI3K/Akt信号转导途径发挥保护作用。
摘要第3-5页
ABSTRACT第5-6页
前言第10-12页
技术路线图第12-14页
第一章 慢性肾损伤动物模型建立及EPO/EPOR在肾皮髓区的表达第14-46页
    1.1. 材料与方法第15-26页
        1.1.1 材料第15-18页
            1.1.1.1 实验动物第15页
            1.1.1.2 主要试剂第15-16页
            1.1.1.3 主要仪器设备第16-18页
        1.1.2 方法第18-25页
            1.1.2.1 动物分组与处理第18-19页
            1.1.2.2 标本制备第19页
            1.1.2.3 测定方法第19-25页
        1.1.3 质量监控第25-26页
        1.1.4 统计学分析第26页
    1.2. 结果第26-38页
        1.2.1 大鼠运动过程的一般情况第26-27页
        1.2.2 实验各组生化指标的观察第27-29页
        1.2.3 大鼠肾组织细胞形态学及超微结构检测结果第29-33页
        1.2.4 荧光标记法检测大鼠肾组织EPO/EPOR表达第33-35页
        1.2.5 免疫组化检测大鼠肾组织EPO/EPOR表达第35-37页
        1.2.6 Westernblot法检测大鼠肾EPO/EPOR的蛋白表达结果第37-38页
    1.3. 讨论第38-45页
        1.3.1 体重与力竭运动的关系第38-39页
        1.3.2 跑距与力竭运动的关系第39页
        1.3.3 力竭运动对大鼠携氧能力的影响第39-40页
        1.3.4 力竭运动对大鼠肾组织形态结构及超微结构的影响第40-42页
        1.3.5 力竭运动对大鼠肾功能的影响第42-43页
        1.3.6 EPO/EPOR在慢性肾损伤大鼠肾皮髓区的表达第43-45页
    1.4. 结论第45-46页
第二章 rhEPO对大鼠力竭运动致慢性肾损伤的保护作用及机制的研究第46-82页
    2.1 材料与方法第46-50页
        2.1.1 材料第46-47页
            2.1.1.1 实验动物第46页
            2.1.1.2 实验材料第46-47页
        2.1.2 方法第47-50页
            2.1.2.1 动物分组与处理第47页
            2.1.2.2 标本制备第47-48页
            2.1.2.3 测定方法第48-50页
        2.1.3 统计学分析第50页
    2.2. 结果第50-74页
        2.2.1 大鼠运动过程的一般情况第50-52页
        2.2.2 实验各组生化指标的观察第52-58页
            2.2.2.1 血红蛋白的含量第52-53页
            2.2.2.2 红细胞计数第53-54页
            2.2.2.3 尿蛋白含量第54-55页
            2.2.2.4 血清尿素氮含量第55页
            2.2.2.5 大鼠肾组织MDA含量第55-56页
            2.2.2.6 大鼠肾组织SOD含量第56-57页
            2.2.2.7 大鼠肾组织NO含量第57页
            2.2.2.8 大鼠肾组织NOS含量第57-58页
        2.2.3 大鼠肾组织细胞形态学及超微结构检测结果第58-62页
        2.2.4 TUNEL法标记肾组织细胞凋亡情况第62-63页
        2.2.5 凋亡相关因子Bcl-xl、Caspase-3的蛋白表达第63-69页
        2.2.6 NF-κB、TGF-B1及a-SMA的蛋白表达第69-73页
        2.2.7 大鼠肾组织细胞凋亡及其相关分析第73-74页
    2.3 讨论第74-81页
    2.4 结论第81-82页
第三章 rhEPO对力竭运动致大鼠慢性肾损伤信号转导通路的影响第82-90页
    3.1 材料与方法第82-84页
        3.1.1 材料第82-83页
            3.1.1.1 实验动物第82页
            3.1.1.2 实验材料第82-83页
            3.1.1.3 动物分组与处理第83页
        3.1.2 方法第83-84页
            3.1.2.1 标本制备第83页
            3.1.2.2 测定方法第83-84页
        3.1.3 统计学分析第84页
    3.2 结果第84-87页
        3.2.1 力竭运动致慢性肾损伤模型中rhEPO在PI3K/Akt通路的激活作用第84-85页
        3.2.2 PI3K抑制剂LY294002拮抗rhEPO对力竭运动致慢性肾损伤的保护作用第85-87页
        3.2.3 rhEPO对Caspase-3活性的抑制作用第87页
    3.3 讨论第87-89页
    3.4 结论第89-90页
综合结论第90页
本课题的创新点第90-91页
参考文献第91-99页
综述一第99-113页
    参考文献第109-113页
综述二第113-127页
    参考文献第122-127页
附: 英文缩略词表第127-129页
在读博士期间发表的主要论文、承担课题及获奖情况第129-131页
致谢第131-133页
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