甘蓝型油菜杂交种亲本的遗传多样性评价及其杂交种纯度鉴定

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雄性不育是油菜杂种优势利用的一条重要途径,在杂种优势利用中亲本选配是配制强优势组合、有效利用油菜杂种优势的关键环节。全面系统了解油菜杂交种亲本的亲缘关系、系谱来源、遗传多样性及材料间遗传距离的大小,可以减少亲本选配的盲目性,提高杂交育种工作的可预见性。 种子不仅是农业生产的源泉,还是世界贸易的重要组成部分。杂交种由于商业化程度高,因而有少数的经营者对杂交种掺假或以次充好坑害消费者,甚至以非法手段获取杂交种亲本生产杂交种,从而严重损害了育种工作者和合法的种子生产经营者的正当权益。另外在杂交制种中,由于不育系不育性不彻底或由于温度、光照的影响导致不育系产生微量花粉,进而导致F1杂种中混杂不育株,如果比例过高,会严重影响杂交种的产量。因而保护杂交种亲本和杂交种纯度分析在杂交种生产经营中占据着越来越重要的地位。 本研究利用分子标记对甘蓝型油菜杂交种亲本的遗传多样性加以评价,以期更全面地了解这些亲本材料所包含的遗传信息和杂交种亲本间的遗传距离,为更好地利用这些材料提供一定的理论参考;同时构建杂交种亲本的DNA指纹图谱,为保护这些材料提供分子证据和手段。并以H9901、H9905两个大田生产F1杂种群体为材料,通过研究比较,从RAPD和SSR两种标记中选择一种合适的标记并建立相应的技术体系用于杂交种纯度分析。用于81 10A与8759R配置的杂交种H99O5的纯度鉴定。两引物均能在父母本中扩出特异带,为共显性标一记,不仅能够鉴别杂交种中混杂的母本自交的种子和父本的种子,还可鉴别部分由于外来花粉或机械混杂等造成的假杂种。3.对87s9R(Yo7)、8086A(Yol)、sll0A(Y22)3个亲本筛选RApD引物,选择能在父本 中扩增出特异带的引物52087、588对大田生产FI杂种群体H9901和H9905进行了 纯度鉴定,最后通过比较RAPD和SSR两种标记,认为用SSR标记进行杂交种纯度 分析是最好的,不仅经济高效,且准确可靠。
中文摘要第6-8页
ABSTRACT第8页
缩略语表第10-11页
第一章 文献综述和开题设想第11-18页
    1 DNA分子标记及其在植物遗传育种的应用第11-16页
        1.1 DNA分子标记的种类第11页
        1.2 DNA分子标记在植物遗传育种的应用第11-16页
            1.2.1 基因组学研究第11-13页
            1.2.2 基因定位、克隆第13-14页
            1.2.3 构建品种DNA指纹图谱第14页
            1.2.4 植物遗传多样性研究第14-15页
            1.2.5 分子标记辅助选择育种第15-16页
            1.2.6 杂种优势预测和机理研究第16页
    2 本项研究的目的意义第16-17页
    3 本项研究的主要内容第17-18页
第二章 甘蓝型油菜杂交种亲本遗传多样性评价及利用第18-34页
    1 前言第18页
    2 材料和方法第18-22页
        2.1 试验材料第18-20页
        2.2 实验方法第20-22页
            2.2.1 取样第20页
            2.2.2 DNA提取第20页
            2.2.3 SSR和ISSR分析第20-22页
            2.2.4 数据统计与分析第22页
    3 结果与分析第22-30页
        3.1 50份甘蓝型油菜的SSR和ISSR扩增效果及多态性位点比率第22-24页
        3.2 50份甘蓝型油菜成对比较的遗传距离第24-26页
        3.3 50份甘蓝油菜的UPGMA聚类结果第26-30页
    4 讨论和结论第30-31页
        4.1 不同分子标记用于遗传多样性评价的比较第30页
        4.2 甘蓝型油菜杂交种亲本的遗传基础第30-31页
        4.3 甘蓝型油菜杂交种亲本间遗传距离与杂种优势的关系第31页
    5 附录:双低甘蓝型油菜杂交种亲本的DNA指纹第31-34页
第三章 双低甘蓝型油菜杂交种纯度鉴定第34-46页
    1 前言第34页
    2 材料和方法第34-37页
        2.1 试验材料第34-35页
        2.2 实验方法第35-37页
            2.2.1 田间种植及大田生产F_1杂种群体的育性调查第35页
            2.2.2 DNA提取第35页
                2.2.2.1 SDS法大量提取亲本基因组DNA第35页
                2.2.2.2 SDS法小量提取大田生产F_1杂种群体单株基因组DNA第35页
            2.2.3 RAPD分析第35-36页
                2.2.3.1 随机引物第35页
                2.2.3.2 RAPD-PCR反应体系的优化第35-36页
                2.2.3.3 琼脂糖凝胶电泳检测第36页
                2.2.3.4 亲本多态性引物筛选第36页
                2.2.3.5 大田生产F_1杂种群体RAPD分析第36页
            2.2.4 SSR分析第36-37页
                2.2.4.1 SSR的PCR反应第36页
                2.2.4.2 PAGE检测第36页
                2.2.4.3 亲本多态性引物筛选第36-37页
                2.2.4.4 大田生产F_1杂种群体的SSR分析第37页
    3 结果与分析第37-43页
        3.1 RAPD分析第37-40页
            3.1.1 亲本多态性引物筛选第37页
            3.1.2 大田生产F_1杂种群体RAPD分析第37-40页
        3.2 SSR分析第40-43页
            3.2.1 亲本多态性引物筛选第40页
            3.2.2 大田生产F_1杂种群体分析第40-43页
        3.3 RAPD、SSR及田间调查鉴定的杂交种纯度第43页
    4 讨论和结论第43-46页
        4.1 关于构建杂交种亲本指纹图谱和建立杂交种纯度分析体系第43-44页
        4.2 RAPD和SSR两种标记用以杂种纯度分析的比较第44页
        4.3 低成本,简易快速,准确鉴别杂种方法的探讨第44-46页
参考文献第46-51页
致谢第51页
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