血管紧张素-(1-7)对血管紧张素Ⅱ激活人脐静脉内皮细胞p38 MAPK的拮抗作用

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背景和目的目前认为,动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种慢性炎症过程,p38属于丝裂原活化蛋白激酶(mitogen - activated protein kinase , MAPK)家族,p38MAPK通路活化后,主要参与炎症反应的调控,介导炎症反应,参与AS形成。肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)是重要的体液调节系统,血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)是该系统的重要生物活性肽。研究表明,AngⅡ可通过AT1受体激活p38MAPK通路,从而诱导多种炎症因子的表达,促进单核细胞与内皮细胞黏附、浸润,介导炎症反应,参与AS形成。而血管紧张素-(1-7)(angiotensin -1-7,Ang-1-7)是RAS的新成员,具有利钠利尿、降血压、抗增生等拮抗AngⅡ的作用。Ang-(1-7)能否拮抗AngⅡ激活内皮细胞p38 MAPK通路,从而阻断炎症反应的作用,国内外相关文献报道较少。本实验用一定浓度的AngⅡ诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells ,HUVECs),用不同浓度的Ang-(1-7)共育,以磷酸化p38MAPK为指标,应用Western blot方法检测磷酸化p38MAPK的表达;并用RT-PCR方法检测了Ang-(1-7)发挥此作用的特异性受体Mas,揭示Ang-(1-7)拮抗AngⅡ促炎作用的可能机制,从而进一步明确Ang-(1-7)的心血管保护作用,为心血管疾病防治和用药提供新的理论依据。方法1、脐静脉内皮细胞培养鉴定。2、试验分组及方法1)磷酸化p38MAPK测定,分两大组:Ⅰ组:(1)对照组培养液不加干扰因素;(2) Ang-(1-7)组加入Ang-(1-7) 100nmol/L(终浓度,以下同)作用20分钟;(3) AngⅡ组加入AngⅡ100nmol/L作用5分钟;(4) Ang-(1-7)+AngⅡ组先加入Ang-(1-7) 100nmol/L 20分钟后再加入100nmol/L的AngⅡ作用5分钟;(5) A-779+Ang-(1-7)+AngⅡ组先加入Ang-(1-7)受体拮抗剂A-779 10,000nmol/L 10分钟,再加Ang-(1-7)100nmol/L 20分钟,最后加入终浓度为100nmol/L AngⅡ作用5分钟;(6)A-779组加A-779 10,000nmol/L单独作用10分钟。Ⅱ组:(1)对照组培养液不加干扰因素;(2)AngⅡ组加入AngⅡ100nmol/L;(3)—(6)组Ang-(1-7)+AngⅡ组分别加入Ang-(1-7)10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L、10,000nmol/L后再加入AngⅡ100nmol/L。以上各组作用时间同Ⅰ组,各组离心后收集沉淀细胞,提取蛋白后用Western blot法检测蛋白表达。2) Mas受体测定:(1)—(5)组分别加入Ang-(1-7) 0 nmol/L、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L、10,000nmol/L 20分钟后用Trizol抽提RNA,用RT-PCR法检测mRNA。结果1、正常细胞生长良好,呈鹅卵石样镶嵌排列,细胞透明度大,轮廓不清。荧光免疫组化染色法,可检测到培养的HUVECs的VⅢ因子相关抗原为阳性。2、与对照组比较,100nmol/L AngⅡ作用于培养的内皮细胞,HUVECs p38MAPK磷酸化表达显著增加(2.17±0.18, p<0.005);100nmol/L Ang-(1-7)组、10,000 nmol/L A-779组可以检测到少量的磷酸化p38MAPK表达,分别为1.22±0.12、1.05±0.11,但无统计学意义(p>0.05)。3、与AngⅡ组比较, Ang-(1-7)+AngⅡ组, p38MAPK磷酸化表达显著减少(1.69±0.19,P<0.01); A-779+Ang-(1-7)+AngⅡ组HUVECs p38MAPK磷酸化表达则无明显变化(2.21±0.27,P﹥0.05)。4、与AngⅡ组比较,随着Ang-(1-7)浓度增加(10、100、1000、10,000nmol/L),Ang-(1-7)+AngⅡ组HUVECs p38MAPK磷酸化表达逐渐减少,在100、1000 nmol/L时,p38MAPK磷酸化表达分别减少为(1.67±0.15, P<0.01)、(1.33±0.11,P<0.01) ,在10,000nmol/L时p38MAPK磷酸化表达为(1.09±0.07, P <0.005)。结论1、AngⅡ可使内皮细胞p38MAPK磷酸化表达明显增加。2、Ang-(1-7)可以拮抗AngⅡ诱导的脐静脉内皮细胞p38MAPK磷酸化表达,并呈浓度依赖性。3、Ang-(1-7)上述作用通过其特异性受体MAS发挥作用。
中文摘要第5-7页
英文摘要第7-8页
正文第9-27页
    前言第9-10页
    材料与方法第10-15页
    结果第15-17页
    讨论第17-20页
    结论第20-21页
    参考文献第21-27页
综述第27-35页
    正文第27-32页
    参考文献第32-35页
个人简介第35-36页
致谢第36页
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