目的膀胱癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤之一,具有高复发率和进展性的临床特征,目前对于膀胱癌的治疗以手术为主,术后化疗是一种有效预防肿瘤复发、转移的辅助治疗策略,但肿瘤对化疗药物耐药是其治疗失败的主要原因。基于此,在分子水平探讨膀胱癌的可能发病机制,有助于为膀胱癌的治疗提供新的途径,也有助于分析肿瘤患者预后,进而改善膀胱癌患者的治疗效果。MicroRNA(mi RNA)是一类微小的内源性非编码的RNA,通过与靶基因mRNA的3’端非翻译区结合,降解mRNA或/和抑制mRNA翻译来抑制靶基因的表达。很多研究表明miRNA在肿瘤中异常表达,在肿瘤的发生发展中起着重要作用。miR-612对很多肿瘤具有抑制作用,如肝癌,结直肠癌等,但miR-612对膀胱癌的作用暂时无报道,本研究的目的为,验证miR-612靶向调控ME1,并进一步阐述这种靶向调控作用对膀胱癌细胞的影响,以及初步研究其可能的作用的机制。方法采用Real-time PCR检测miR-612在膀胱癌组织和癌旁组织中的表达差异,和膀胱癌TNM分期、远处转移的关系,以及在永生化尿路上皮细胞和膀胱癌细胞系中的表达差异。通过lipofectamine 3000转染miR-612 mimic和miR-NC进膀胱癌细胞系T24细胞,并通过Real-time PCR验证miR-612过表达。采用CCK-8法、平板克隆形成、Transwell实验等方法对miR-612过表达后的细胞进行实验,从细胞增殖,克隆形成,迁移,侵袭等方面来检测miR-612对膀胱癌细胞T24生物学行为的影响,并通过裸鼠体内实验验证miR-612过表达后对肿瘤形成的抑制作用。同时用Western blooting实验探究过表达miR-612后对EMT(上皮间质化)进程的影响。通过DIANAmT,miRanda,miRDB,miRWalk,PICTAR5,RNA22 and TargetScan等软件预测miR-612可能的靶基因,之后通过Real-time PCR验证miR-612过表达后表达下降的靶基因,并通过western blot和Luciferase reporter assays进一步验证出miR-612的靶基因ME1。使用小干扰RNA(siRNA)干扰ME1表达后研究ME1对膀胱癌细胞T24的生物学特性以及对EMT的影响通过rescue实验,在将miR-612 mimic转染进T24细胞过表达miR-612的同时转染ME1过表达的质粒,进一步验证miR-612的靶基因是ME1。结果miR-612在膀胱癌组织中的表达低于癌旁组织,在膀胱癌细胞(5637、J82,UMUC3、T24)中的表达低于永生化尿路上皮细胞SV-HUC-1,且在T24细胞中的表达最低;同时,膀胱癌的TNM分期越高,miR-612的表达反而越低,发生远处转移的膀胱癌标本相比未发生转移的膀胱癌标本中miR-612的表达要高;成功将miR-612 mimic和miR-NC通过lipofectamine 3000转染进T24细胞;过表达miR-612对膀胱癌具有抑制作用,抑制膀胱癌T24细胞增殖和克隆形成,抑制细胞迁移和侵袭;T24细胞过表达miR-612后相比miR-NC组,EMT的分子标志物N-cadherin、Vimentin和MMP9显著降低,而E-cadherin显著升高;通过DIANAmT,miRanda,miRDB,miRWalk,PICTAR5,RNA22 and TargetScan等软件预测及Real-time PCR,western blot和Luciferase reporter assays成功找到并验证出ME1是miR-612的一个有效靶基因;ME1在膀胱癌肿瘤的表达高于癌旁组织中的表达。通过siRNA干扰细胞中ME1的表达后对T24细胞产生与miR-612过表达后相似的作用;Rescue实验表明ME1过表达能部分抵消miR-612对膀胱癌细胞T24的抑制作用。结论miR-612在膀胱癌中低表达可作为潜在的诊断膀胱癌的指标。miR-612在膀胱癌中起到抑制细胞生长,迁移,侵袭等作用并抑制EMT的进程,与干扰ME1表达的结果相似。我们的研究首次揭示了miR-612在膀胱癌细胞中调控ME1从而对膀胱癌的生物学行为进行调控的潜在机制,可能为膀胱癌的治疗提供新的思路。