乐至黑山羊GH、IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ基因的多态性与cDNA克隆及组织表达的研究

乐至黑山羊论文 GH论文 IGF-Ⅰ论文 IGF-Ⅱ论文 荧光定量PCR论文
论文详情
加强对山羊多胎性能的遗传机制研究,提高繁殖力,是保护我国优良山羊品种,发展我国山羊生产的重要途径。本研究对高繁乐至黑山羊GH、IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ基因多态性与产羔性能的相关性进行分析,并对乐至黑山羊和藏山羊这3个基因cDNA克隆、序列分析和组织表达研究,以期为揭示乐至黑山羊高繁殖性能的分子机理奠定科学基础。(1)GH、IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ基因多态性与产羔性能的相关性分析:以有前2胎产羔记录的157只乐至黑山羊为研究对象,采用PCR-SSCP技术对GH、IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ基因5’侧翼区和外显子序列进行多态位点的检测,并与乐至黑山羊产羔数进行关联分析。结果显示:GH基因除第一外显子外,其余外显子和5’侧翼区均有单核苷酸突变;IGF-Ⅰ基因只在第2外显子检测到单核苷酸突变,而IGF-Ⅱ基因并未检测到多态位点。统计结果显示GH和IGF-Ⅰ基因的单突变位点对乐至黑山羊产羔率的遗传效应未达到显著水平(P > 0.05)。(2)GH、IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ基因cDNA克隆与序列分析:利用RT-PCR技术克隆得到乐至黑山羊和藏山羊GH、IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ三个基因完整的编码区,CDS编码区长分别654bp、465bp和540bp,编码217、154和179个氨基酸。对其核苷酸序列和氨基酸序列进行比对的结果显示:乐至黑山羊和藏山羊GH基因上存在1处核苷酸差异,并且导致了氨基酸发生变化;IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ基因皆存在2处核苷酸差异,但是没有导致氨基酸的变化。(3)GH、IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ基因的mRNA组织表达研究:以GAPDH为内参基因,采用Real-time PCR技术对发情第1天的乐至黑山羊(n=6)与藏山羊(n=6)垂体、子宫和卵巢上的GH、IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ的mRNA表达量进行测定。结果显示,这3个基因不同组织mRNA表达量的两个山羊品种存在一定差异。本研究首次对乐至黑山羊GH、IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ基因多态性、cDNA克隆和组织表达进行了研究,为揭示山羊高繁殖性能的分子机理奠定了科学基础。
摘要第4-5页
Abstract第5-6页
前言第10-11页
第一章 GH-IGFs 轴基因和研究方法第11-21页
    1 生长激素研究进展第11-13页
        1.1 生长激素(GH)的结构和功能第11页
        1.2 生长激素信号传导途径第11-12页
        1.3 生长激素的应用第12-13页
    2 胰岛素样生长因子(IGFs)研究进展第13-16页
        2.1 生长因子第13页
        2.2 胰岛素样生长因子(IGF)概述第13页
        2.3 胰岛素样生长因子系统(IGFs)第13-14页
        2.4 胰岛素样生长因子(IGFs)研究进展第14-16页
            2.4.1 IGF-Ⅰ 研究进展第14-15页
                2.4.1.1 IGF-Ⅰ 结构第14-15页
                2.4.1.2 IGF-Ⅰ 生物学功能及与动物性状的相关性研究第15页
            2.4.2 IGF-Ⅱ 研究进展第15-16页
                2.4.2.1 IGF-Ⅱ 结构第15页
                2.4.2.2 IGF-Ⅱ 生物学功能第15-16页
                2.4.2.3 IGF-Ⅱ 与基因印记第16页
    3 DNA 分子标记第16-19页
        3.1 DNA 分子标记技术概述第16页
        3.2 DNA 分子标记的分类第16-17页
        3.3 PCR-SSCP 技术第17-19页
            3.3.1 PCR-SSCP 技术的原理第17页
            3.3.3 PCR-SSCP 的应用第17-19页
                3.3.3.1 PCR-SSCP 在微生物研究中的应用第17-18页
                3.3.3.2 PCR-SSCP 在植物研究中的应用第18页
                3.3.3.3 PCR-SSCP 在动物育种中的应用第18-19页
    4 荧光定量PCR 技术第19-21页
        4.1 荧光定量PCR 技术(Real-time fluorescent quantitative PCR,qPCR)第19页
        4.2 荧光定量PCR 技术的类型及特点第19-21页
            4.2.1 DNA 结合染料(SYBR Green I)第19页
            4.2.2 TaqMan 探针第19-20页
            4.2.3 分子信标第20-21页
第二章 乐至黑山羊GH、IGF-Ⅰ 和IGF-Ⅱ 基因多态性与产羔数的相关性研究第21-40页
    1 材料第21-23页
        1.1 动物样品第21页
        1.2 主要试剂和仪器第21-23页
            1.2.1 主要试剂第21-22页
            1.2.2 主要仪器第22-23页
    2 方法第23-28页
        2.1 DNA 提取第23页
        2.2 DNA 浓度和纯度的检测第23-24页
        2.3 PCR 引物设计第24-26页
            2.3.1 GH 基因 PCR-SSCP 引物设计第24页
            2.3.2 IGF-Ⅰ 基因PCR-SSCP 引物设计第24页
            2.3.3 IGF-Ⅱ 基因PCR-SSCP 引物设计第24-26页
        2.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SSCP)第26页
        2.5 PCR 产物的纯化第26页
        2.6 TA 克隆第26-27页
        2.7 数据统计第27-28页
            2.7.1 基因型频率和基因频率第27页
            2.7.2 杂合度He 和多态信息含量(PIC)第27-28页
    3 结果与分析第28-37页
        3.1 基因组DNA 提取效果第28页
        3.2 目的片段扩增效果第28-29页
        3.3 SSCP 检测结果第29-32页
            3.3.1 GH 基因SSCP 检测结果第29-31页
            3.3.2 IGF-Ⅰ 基因SSCP 检测结果第31页
            3.3.3 IGF-Ⅱ 基因SSCP 检测结果第31-32页
        3.4 序列分析第32-35页
            3.4.1 GH 基因多态序列分析第32-35页
                3.4.1.1 GH 5’侧翼区多态序列分析第32-33页
                3.4.1.2 GH exon2 多态序列分析第33页
                3.4.1.3 GH exon3 多态序列分析第33-34页
                3.4.1.4 GH exon4 多态序列分析第34页
                3.4.1.5 GH exon5 多态序列分析第34-35页
            3.4.2 IGF-Ⅰ 基因第2 外显子多态序列分析第35页
        3.5 GH 基因的遗传多态性第35页
        3.6 IGF-Ⅰ 基因ex0112 的遗传多态性第35-36页
        3.7 GH 基因单突变位点对乐至黑山羊产羔性状的遗传效应第36页
        3.8 IGF-Ⅰ 基因单突变位点对乐至黑山羊产羔性状的遗传效应第36-37页
    4 讨论第37-39页
        4.1 GH 基因多态性及遗传效应第37-38页
        4.2 IGFs 的多态性及遗传效应第38-39页
    5. 小结第39-40页
第三章 乐至黑山羊与藏山羊GH、IGF-Ⅰ 和IGF-Ⅱ 基因的克隆及组织表达研究第40-57页
    1 材料第40-41页
        1.1 动物组织的采集第40页
        1.2 主要试剂和仪器第40-41页
            1.2.1 主要试剂第40-41页
            1.2.2 主要仪器第41页
    2 方法第41-44页
        2.1 总RNA 的提取第41-42页
        2.2 总RNA 完整性和纯度检测第42页
        2.3 cDNA 的合成第42页
        2.4 引物设计第42-43页
        2.5 目的片段的PCR 扩增及检测第43页
        2.6 TA 克隆第43页
        2.7 荧光定量引物设计第43页
        2.8 实时荧光定量PCR第43-44页
        2.9 统计分析第44页
    3 结果第44-54页
        3.1 RNA 提取质量第44页
        3.2 目的片段扩增效果第44-45页
        3.3 GH 基因序列分析第45-47页
            3.3.1 乐至黑山羊和藏山羊GH 基因的序列差异性比较第45-46页
            3.3.2 GH 基因CDS 编码区的一致性比较第46页
            3.3.3 GH 基因氨基酸同源性比较第46-47页
        3.4 IGF-Ⅰ 基因序列分析第47-48页
            3.4.1 乐至黑山羊和藏山羊IGF-Ⅰ 基因的序列差异性比较第47页
            3.4.2 IGF-Ⅰ 基因CDS 编码区的一致性比较第47-48页
            3.4.3 IGF-Ⅰ 基因氨基酸同源性比较第48页
        3.5 IGF-Ⅱ 基因序列分析第48-50页
            3.5.1 乐至黑山羊和藏山羊IGF-Ⅱ 基因的序列差异性比较第48-49页
            3.5.2 IGF-Ⅱ 基因CDS 编码区的一致性比较第49页
            3.5.3 IGF-Ⅱ 基因氨基酸同源性比较第49-50页
        3.6 荧光定量引物的扩增效果第50页
        3.7 目的基因与看家基因的熔点曲线第50-51页
        3.8 目的基因与看家基因的标准曲线第51-53页
        3.9 荧光定量结果分析第53-54页
    4. 讨论第54-56页
        4.1 克隆cDNA 序列分析第54-55页
        4.2 基因组织表达量分析第55-56页
    5. 小结第56-57页
结论第57-58页
参考文献第58-64页
附录:研究生阶段发表的论文第64-65页
致谢第65-66页
论文购买
论文编号ABS536939,这篇论文共66页
会员购买按0.30元/页下载,共需支付19.8
不是会员,注册会员
会员更优惠充值送钱
直接购买按0.5元/页下载,共需要支付33
只需这篇论文,无需注册!
直接网上支付,方便快捷!
相关论文

点击收藏 | 在线购卡 | 站内搜索 | 网站地图
版权所有 艾博士论文 Copyright(C) All Rights Reserved
版权申明:本文摘要目录由会员***投稿,艾博士论文编辑,如作者需要删除论文目录请通过QQ告知我们,承诺24小时内删除。
联系方式: QQ:277865656