目的研究氧化应激关键调控蛋白过氧化物酶1(peroxiredoxin 1,PRDX1)和重要炎症转导信号分子肿瘤坏死因子受体相关因子1(TNF receptor-associated factor 1,TRAF1)是否参与肝脏胰岛素抵抗的发生,探索PRDX1和TRAF1在肝脏胰岛素抵抗中发挥的作用及机制,为阐明肝脏胰岛素抵抗分子机制提供理论基础,为2型糖尿病的治疗提供新的药物设计和治疗靶点。方法(1)建立肝脏胰岛素抵抗模型。棕榈酸孵育Hep G2细胞建立胰岛素抵抗的细胞模型,高脂喂养C57B L/6J小鼠建立胰岛素抵抗的小鼠模型,用Western Blot检测P-AKT、P-GSK3β的蛋白表达变化鉴定胰岛素抵抗模型。分别用Western Blot和q RT-PCR检测模型中PRDX1和TRAF1的表达变化。(2)在Hep G2细胞中分别转染si PRDX1和对照si RNA,转染获得的细胞分别用Western Blot检测PRDX1、P-AKT、P-GSK3β的蛋白表达变化;q RT-PCR检测PEPCK、G6Pase基因表达变化;葡萄糖试剂盒检测Hep G2细胞葡萄糖摄取的变化。(3)在Hep G2细胞中分别转染Flag-PRDX1和对照Flag质粒,转染获得的细胞分别用Western Blot检测PRDX1、P-AKT、P-GSK3β的蛋白表达变化;q RT-PCR检测PEPCK、G6Pase基因表达变化;油红染色检测脂滴聚集的变化;葡萄糖试剂盒检测Hep G2细胞葡萄糖摄取率的变化。(4)加入P38抑制剂联合转染Flag-PRDX1质粒至Hep G2细胞。用Western Blot检测PRDX1、P-AKT、P-GSK3β、P-P38的蛋白表达变化。(5)在Hep G2细胞中分别转染si TRAF1和对照si RNA,转染获得的细胞分别用Western Blot检测PRDX1、P-AKT的蛋白表达变化;q RT-PCR检测PEPCK、G6Pase基因表达变化;葡萄糖试剂盒检测Hep G2细胞葡萄糖摄取的变化,油红染色检测脂滴聚集的变化。(6)胰岛素抵抗的Hep G2细胞中,Western Blot检测P-P65、IκBα水平,ELISA检测TNF-α和IL-6水平。在Hep G2细胞中分别转染si TRAF1和对照si RNA后,Western Blot检测P-P65和IκBα水平,ELISA检测TNF-α和IL-6水平。结果(1)在胰岛素抵抗的细胞和动物模型中,PRDX1、TRAF1的蛋白表达升高。(2)在PA诱导的胰岛素抵抗的Hep G2细胞中:1)敲低PRDX1的表达,P-AKT、P-GSK3β的蛋白表达升高,PEPCK、G6Pase基因表达降低;Hep G2细胞葡萄糖摄取率增加。2)过表达PRDX1,P-AKT、P-GSK3β的蛋白表达进一步下降,PEPCK、G6Pase基因表达进一步增加;Hep G2细胞中脂质的聚集进一步增加;Hep G2细胞葡萄糖摄取率进一步减少。3)敲低PRDX1,p-p38表达减少,p-JNK表达无变化;过表达PRDX1,p38表达增加;加入p38抑制剂可在一定程度上逆转PRDX1诱导的P-AKT、P-GSK3β的蛋白表达的降低。4)敲低TRAF1的表达,P-AKT蛋白表达升高,PEPCK、G6Pase基因表达降低;Hep G2细胞葡萄糖摄取率增加,细胞内脂质沉积减少。5)在PA诱导的胰岛素抵抗的Hep G2细胞中,P-P65升高而IκBα降低,TNF-α和IL-6水平升高。敲低TRAF1后,P-P65降低、IκBα升高,TNF-α和IL-6水平降低。结论(1)PRDX1和TRAF1在胰岛素抵抗的小鼠肝脏和Hep G2细胞中表达升高。(2)PRDX1和TRAF1均可抑制肝细胞中胰岛素信号通路的传导,可能参与了肝细胞胰岛素抵抗的发生。(3)PRDX1和TRAF1在肝胰岛素抵抗中的作用及分子机制不同,PRDX1可通过促进p38-MAPK通路的活化,进而通过p38直接影响胰岛素通路;TRAF1可能通过调控NF-κB通路,参与胰岛素信号通路的调节,进而参与肝脏胰岛素抵抗的发生。