LHA-伏隔核Orexin-A通路对葡萄糖敏感神经元放电活动和胃运动调控研究

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目的:阐明下丘脑外侧核(LHA)-伏隔核(NAcc)orexin-A神经和功能通路构成,探讨该通路对大鼠葡萄糖敏感神经元(GS)放电活动和胃运动的影响及潜在机制。方法:健康成年雄性Wistar大鼠随机分为三部分:第一部分大鼠采用逆行追踪技术结合免疫荧光组织化学染色法,观察下丘脑外侧核-伏隔核间是否存在orexin-A神经通路;第二部分大鼠采用单细胞外记录放电活动,鉴定伏隔核葡萄糖敏感神经元,并且观察伏隔核内微量注射orexin-A对葡萄糖敏感神经元放电活动的影响,以及电刺激下丘脑外侧核后,伏隔核内orexin-A反应性葡萄糖敏感神经元放电活动的变化;第三部分大鼠通过在体胃运动研究,观察伏隔核内微量注射不同浓度orexin-A对大鼠胃运动幅度和频率的影响,以及电刺激下丘脑外侧核后,大鼠胃运动的变化及机制。结果:逆行追踪结合荧光免疫组织化学染色发现,下丘脑外侧核内有荧光金和orexin-A双重标记的神经元。电生理研究显示,在伏隔核内共记录到62个葡萄糖敏感型神经元(GS),其中有42个GS呈现兴奋效应(GS-E),20个GS呈现抑制效应(GS-I)。伏隔核微量注射orexin-A,在这42个GS-E中,有30个神经元(30/42,71.43%)放电频率显著升高(P<0.05),10个神经元(10/42,23.81%)放电频率显著降低(P<0.05)。在20个GS-I中,伏隔核微量注射orexin-A,其中有15个神经元(15/20,75%)放电活动呈现兴奋效应(P<0.05),有4个神经元(4/20,20%)放电活动呈现抑制效应(P<0.05)。伏隔核预先注射orexin-A受体拮抗剂SB-334867,orexin-A对葡萄糖敏感神经元的兴奋或抑制作用则被完全阻断(P>0.05)。电刺激下丘脑外侧核,在伏隔核记录到的39个orexin-A反应性GS-E神经元中,有28个神经元(28/39,71.79%)进一步呈现兴奋效应(P<0.05),7个神经元(7/39,17.94%)放电活动呈现抑制状态(P<0.05);在伏隔核记录到的20个orexin-A反应性GS-I神经元,其中有14个神经元(14/20,70%)放电频率显著升高(P<0.05),4个神经元(20.0%)放电活动显著减弱(P<0.05)。伏隔核预先注射SB-334867,再电刺激下丘脑外侧核,伏隔核内orexin-A反应性葡萄糖敏感神经元的放电频率均显著下降(P<0.05)。胃运动研究结果显示,伏隔核内微量注射orexin-A,大鼠胃运动幅度和频率显著增加,并呈现显著剂量依赖关系(P<0.05),伏隔核预先微量注射SB-334867,可反转该效应(P<0.05)。电刺激下丘脑外侧核,大鼠胃运动幅度和频率显著增强(P<0.05)。同样,伏隔核内微量注射SB-334867,再电刺激下丘脑外侧核,电刺激导致的胃运动增强效应显著减弱(P<0.05)。结论:下丘脑外侧核→伏隔核存在orexin-A神经和功能通路,该通路可能参与胃动力和能量代谢调控。
摘要第2-4页
Abstract第4-5页
引言第8-10页
材料和方法第10-17页
    1 实验材料第10-12页
        1.1 实验动物第10页
        1.2 实验仪器第10页
        1.3 实验药品第10-11页
        1.4 试剂配制第11-12页
    2 实验方法第12-16页
        2.1 逆行追踪和免疫组织化学染色实验第12-14页
        2.2 电生理实验第14-15页
        2.3 胃运动实验第15-16页
        2.4 电刺激实验第16页
        2.5 组织学检查第16页
    3 统计学分析第16-17页
实验结果第17-26页
    1 下丘脑外侧核-伏隔核orexin-A神经纤维投射第17页
    2 电生理实验第17-22页
        2.1 Orexin-A对伏隔核葡萄糖敏感神经元放电活动的影响第17-20页
        2.2 电刺激下丘脑外侧核对伏隔核orexin-A反应性葡萄糖敏感神经元放电活动的影响第20-22页
    3 胃运动实验第22-26页
        3.1 伏隔核微量注射orexin-A对大鼠胃运动的影响第22-24页
        3.2 伏隔核微量注射SB-334867对电刺激下丘脑外侧核诱导的大鼠胃运动的影响第24-26页
讨论第26-28页
结论第28-29页
参考文献第29-32页
综述第32-52页
    综述参考文献第43-52页
攻读学位期间研究成果第52-53页
致谢第53-54页
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