ZNF139、MRP1、MMP7在人胃癌细胞SGC7901及SGC7901/ADR中的表达及与化疗药物敏感性的关系

目的：胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,有较高的发病率、死亡率，浸润转移及化疗耐药是导致胃癌患者死亡的重要原因，且是目前治疗的两大难点。研究表明，锌指蛋白（zinc finger protein，ZNF）在不同的肿瘤细胞中异常表达，与肿瘤细胞的增殖、耐药和侵袭、血管形成有关，如锌指结构转录因子中的E盒结合锌指蛋白(zinc finger E-box-binding protein，ZEB)能增加金属蛋白酶-2(matrix etalloproteinase2，M M P-2)的R N A水平而被认为与肿瘤的转移密切相关。通过RNA干扰抑制锌指蛋白217(zincfinger protein217，ZNF217)基因表达，能逆转乳腺癌细胞对阿霉素的耐药性，表明其与耐药相关。锌指蛋白139（zinc finger protein139，ZNF139）是本研究所前期发现与胃癌多药耐药相关的蛋白，本实验将研究ZNF139、MRP1、MMP7在人胃癌细胞SGC7901及胃癌耐药细胞SGC7901/ADR中的mRNA及蛋白表达情况，并探讨其在胃癌中耐药及转移的意义；同时行MTT法药敏实验，并分析ZNF139、MRP1、MMP7表达与化疗敏感性的关系。方法：以人胃癌细胞株SGC7901和人耐阿霉素胃癌细胞SGC7901/ADR为研究对象，通过应用细胞培养技术，逆转录-聚合酶连反应（RT-PCR）法检测SGC7901及SGC7901/ADR两种细胞内ZNF139、MRP1、MMP7mRNA表达变化情况，采用免疫印迹技术（Western blot）法检测两种细胞内ZNF139、MRP1、MMP7蛋白表达变化情况，并采用噻唑蓝比色法（MTT）进行化疗药物敏感试验，检测两种胃癌细胞对6种ADR、VCR、5-FU、MMC、CDDP、MTX化疗药物的敏感性。应用统计学方法对胃癌细胞株中ZNF139、MRP1、MMP7的表达进行分析，P<0.05有统计学意义。结果：1人胃癌细胞SGC7901和耐药细胞SGC7901/ADR中ZNF139、MRP1、MMP7mRNA和蛋白的表达情况1.1人胃癌细胞SGC7901和耐药细胞SGC7901/ADR中ZNF139、MRP1、MMP7mRNA均有表达，但在耐药细胞SGC7901/ADR中ZNF139、MRP1、MMP7mRNA表达均明显高于人胃癌细胞SGC7901（P<0.05）。1.2人胃癌细胞SGC7901和耐药细胞SGC7901/ADR中ZNF139、MRP1、MMP7蛋白均有表达，但在耐药细胞SGC7901/ADR中ZNF139、MRP1、MMP7蛋白表达均明显高于人胃癌细胞SGC7901（P<0.05）。2在人胃癌细胞株SGC7901和耐药细胞SGC7901/ADR中ZNF139与MRP1、MMP7蛋白表达相关性2.1在人胃癌细胞株SGC7901中ZNF139与MRP1蛋白表达均呈正相关（r=0.557P=0.042），MRP1与MMP7蛋白表达均呈正相关性（r=0.579P=0.040）。2.2在耐药细胞SGC7901/ADR细胞中ZNF139与MRP1、MMP7蛋白表达呈正相关（r=0.661P=0.019；r=0.673P=0.016）。MRP1与MMP7蛋白表达均呈正相关性（r=0.863P=0.001）。3人胃癌细胞SGC7901和耐药细胞SGC7901/ADR对ADR、VCR、5-FU、MMC、CDDP、MTX化疗药物敏感性比较3.1ADR对人胃癌细胞SGC7901和耐药细胞SGC7901/ADR的抑制率分别为（37.02±8.70）%、（4.08±1.29）%两者有显著性差异（P<0.05）3.2VCR对人胃癌细胞SGC7901和耐药细胞SGC7901/ADR的抑制率分别为（30.82±5.65）%、（18.78±3.06）%两者有显著性差异（P<0.05）3.3MMC对人胃癌细胞SGC7901和耐药细胞SGC7901/ADR的抑制率分别为（33.11±5.80）%、（15.37±2.91）%两者有显著性差异（P<0.05）3.4CDDP对人胃癌细胞SGC7901和耐药细胞SGC7901/ADR的抑制率分别为（31.25±3.95）%、（17.03±3.93）%两者有显著性差异（P<0.05）3.5MTX对人胃癌细胞SGC7901和耐药细胞SGC7901/ADR的抑制率分别为（15.59±3.72）%、（9.67±1.73）%两者有显著性差异（P<0.05）4人胃癌细胞SGC7901和耐药细胞SGC7901/ADR中ZNF139、MRP1、MMP7蛋白表达与化疗药抑制率关系4.1人胃癌细胞SGC7901中MRP1蛋白表达与VCR、CDDP、MTX对其的抑制率呈负相关（r=-0.820P=0.004；r=-0.586P=0.0375；r=-0.742P=0.007）人耐药胃癌细胞SGC7901/ADR中MRP1蛋白表达与ADR、VCR、5-FUMMC、CDDP对其的抑制率呈负相关(r=-0.803P=0.005；r=-0.755P=0.006；r=-0.614P=0.029；r=-0.563P=0.045；r=-0.633P=0.025)4.2人胃癌细胞SGC7901中ZNF139蛋白表达与VCR、MMC对其的抑制率呈负相关(r=-0.667P=0.0175；r=-0.861P=0.001)人耐药胃癌细胞SGC7901/ADR中ZNF139蛋白表达与ADR、VCR、5-FU、CDDP对其的抑制率呈负相关（r=-0.658P=0.019；r=-0.585P=0.038；r=-0.557P=0.047；r=-0.559P=0.046）4.3人胃癌细胞SGC7901中MMP7蛋白表达与VCR、5-FU、MMC、MTX对其的抑制率呈负相关(r=-0.665P=0.018；r=-0.681P=0.015；r=-0.788P=0.007；r=-0.651P=0.042)人耐药胃癌细胞SGC7901/ADR中MMP7蛋白表达与ADR、VCR、MTX对其的抑制率呈负相关（r=-0.845P=0.002；r=-0.744P=0.007；r=-0.596P=0.034）结论：1ZNF139、MRP1、MMP7mRNA和蛋白在胃癌耐药细胞SGC7901/ADR中高表达，说明其在基因及蛋白水平均参与了胃癌多药耐药。2在耐药细胞SGC7901/ADR中ZNF139、MRP1、MMP7蛋白表达均呈正相关，表明胃癌细胞产生耐药同时可能会促进胃癌细胞的侵袭转移，并且ZNF139可能是MRP1、MMP7的共同调控机制。3胃癌细胞SGC7901在耐阿霉素时，对多种不同机制、作用靶点的化疗药物也产生耐药，进一步说明了ZNF139、MRP1、MMP7参与了胃癌的多药耐药。4ZNF139、MRP1、MMP7对其中部分化疗药物抑制率具有相关性，并且在两种细胞中存在差别，说明胃癌细胞耐药后其药物的耐药途径可能会发生变化，进一步说明ZNF139、MRP1、MMP7共同参与了胃癌多药耐药，胃癌多药耐药是多环节、多因素、多机制共同参与的复杂过程。