森林草莓锌指蛋白ZFP介导SVBV P6蛋白泛素化的机制研究
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论文详情
| 致谢 | 第4-5页 |
| 中文摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 文献综述 | 第13-20页 |
| 1 草莓镶脉病毒基本特征及其编码的P6蛋白的功能 | 第13-14页 |
| 1.1 草莓镶脉病毒基本特征、分布及危害 | 第13页 |
| 1.2 草莓镶脉病毒的分类及基因组编码的蛋白 | 第13-14页 |
| 1.3 P6蛋白在CaMV各ORF翻译过程中的作用 | 第14页 |
| 2 植物病毒致病因子与寄主因子的互作 | 第14-15页 |
| 3 植物锌指蛋白的生物学特性及功能 | 第15-16页 |
| 3.1 锌指蛋白的结构和性质 | 第15页 |
| 3.2 锌指蛋白ZFP对植物生长发育的影响 | 第15页 |
| 3.3 锌指蛋白的抗逆作用 | 第15页 |
| 3.4 锌指蛋白的抗菌作用 | 第15-16页 |
| 3.5 锌指蛋白的抗病毒作用 | 第16页 |
| 3.6 锌指蛋白能与病毒蛋白互作 | 第16页 |
| 4 泛素/26S蛋白酶体降解系统在植物抗病响应中的作用 | 第16-20页 |
| 4.1 泛素/26S蛋白酶体降解系统 | 第16-17页 |
| 4.2 UPS的组成 | 第17页 |
| 4.3 26S蛋白酶体 | 第17-18页 |
| 4.4 泛素/26S蛋白酶降解系统对植物-病原物互作的响应 | 第18-20页 |
| 引言 | 第20-21页 |
| 材料与方法 | 第21-28页 |
| 1 供试材料 | 第21-22页 |
| 1.1 病样来源 | 第21页 |
| 1.2 植物材料 | 第21页 |
| 1.3 菌种载体、质粒 | 第21页 |
| 1.4 酶和化学试剂 | 第21页 |
| 1.5 抗生素使用 | 第21页 |
| 1.6 实验仪器设备 | 第21-22页 |
| 2 试验方法 | 第22-28页 |
| 2.1 草莓总DNA提取 | 第22页 |
| 2.2 植物总RNA提取 | 第22页 |
| 2.3 PCR产物纯化、回收和连接载体 | 第22页 |
| 2.3.1 PCR产物连接 | 第22页 |
| 2.4 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第22-23页 |
| 2.5 连接产物转化大肠杆菌 | 第23页 |
| 2.6 阳性克隆的PCR鉴定 | 第23页 |
| 2.7 质粒提取及质粒鉴定 | 第23页 |
| 2.8 农杆菌瞬时浸润 | 第23页 |
| 2.9 载体构建 | 第23-25页 |
| 2.10 酵母双杂交实验(Yeasttwo-hybridsystem,Y2H) | 第25页 |
| 2.10.1 质粒转化酵母(PEG/醋酸锂法)小量制备法,用于单转和双转 | 第25页 |
| 2.10.2 互作验证 | 第25页 |
| 2.11 BIFC实验(Bimolecularfluorescencecomplementation,BiFC) | 第25页 |
| 2.12 DAPI染色实验 | 第25-26页 |
| 2.13 免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP) | 第26页 |
| 2.14 qRT-PCR实验 | 第26页 |
| 2.15 载体构建 | 第26-28页 |
| 结果与分析 | 第28-41页 |
| 1 SVBVP6蛋白与森林草莓锌指蛋白ZFP互作鉴定 | 第28-30页 |
| 1.1 酵母双杂交(Y2H)验证P6蛋白与ZFP蛋白互作 | 第28-29页 |
| 1.2 双分子荧光互补验证(BiFC)P6与ZFP在植物体内互作 | 第29页 |
| 1.3 免疫共沉淀实验(Co-IP)验证P6与ZFP在植物体内互作 | 第29-30页 |
| 2 森林草莓锌指蛋白ZFP基因的序列比较及分子进化分析 | 第30-32页 |
| 2.1 森林草莓锌指蛋白ZFP核苷酸序列与其他植物锌指蛋白相似性比较 | 第30-32页 |
| 2.2 森林草莓锌指蛋白ZFP基因系统进化树分析 | 第32页 |
| 3 锌指蛋白ZFP基因在SVBV感染的森林草莓中的差异表达 | 第32-33页 |
| 4 锌指蛋白ZFP亚细胞定位及其与P6蛋白共定位鉴定 | 第33-34页 |
| 5 森林草莓锌指蛋白ZFP介导P6在植物体内泛素化降解研究 | 第34-39页 |
| 5.1 ZFP蛋白能够影响P6蛋白聚集 | 第34-36页 |
| 5.2 森林草莓ZFP蛋白影响P6蛋白在植物体内表达 | 第36-37页 |
| 5.3 半体内实验检测26S蛋白酶体抑制剂MG132对P6蛋白降解的抑制作用 | 第37-38页 |
| 5.4 体内验证蛋白酶体抑制剂能抑制ZFP介导P6蛋白降解 | 第38-39页 |
| 6 植物ZFP蛋白对P6蛋白介导PVX在本氏烟上症状表型的的影响 | 第39-41页 |
| 讨论 | 第41-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-51页 |
| 作者简介 | 第51页 |
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