TGFβ3基因对Wistar大鼠皮肤成纤维细胞分泌TGFβ的影响

背景与目的在多种生长因子中，转化生长因子β(TGFβ)在组织纤维化中扮演重要角色。在哺乳动物细胞内已经发现三种亚型：TGFβ1、β2和β3，这三种亚型基因在不同种属间高度保守。TGFβ可以被涉及创面愈合的大部分细胞分泌，包括：巨噬细胞、成纤维细胞等。它们在创面愈合中扮演不同角色，TGFβ1和β2能够诱导瘢痕形成，而TGFβ3却能抑制瘢痕形成。本实验将pcDNA3.1(-)／TGFβ3稳定转染到原代培养的Wistar大鼠皮肤成纤维细胞内，筛选转基因细胞。采用流式细胞术检测转染前后细胞内TGFβ含量的变化，对基因转染成纤维细胞TGFβ分泌等生物学行为进行初步研究，为临床应用提供实验依据。方法1采用植块培养法和分离细胞培养法，原代培养Wistar大鼠皮肤真皮层中成纤维细胞。2通过脂质体介导的转染技术和G418筛选法，将已经构建好的pcDNA3.1(-)／TGFβ3稳定转染成纤维细胞；得到单克隆细胞，并扩增得到转基因细胞。3流式细胞仪检测细胞内TGFβ1、β3含量。结果1成功获得稳定表达细胞克隆。2流式细胞检测结果：正常细胞内TGFβ总量为60.86，TGFβ1／TGFβ3=1.38；而转染后TGFβ总量为225.23，TGFβ1／TGFβ3=0.09。上述结果表明，转基因细胞内TGFβ3表达明显比正常细胞高，而TGFβ1表达比正常细胞低。结论通过脂质体介导的转染技术和G418筛选法，将pcDNA3.1(-)／TGFβ3稳定转染成纤维细胞，得到的转基因细胞能够表达TGFβ3蛋白，并且能够抑制TGFβ1蛋白的表达。从而为其应用于创面移植提供了理论基础。