研究目的：本实验通过血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs),建立氧化应激模型,探讨Ang-(1-7)对AngⅡ致HUVECs氧化应激损伤的影响及机制分析。研究方法：无菌培养HUVECs,选择生长良好的第2-5代细胞用于实验。实验分为：(1)对照组：不加干预因素；(2)Ang-(1-7)组：加入10-6mol/L的Ang-(1-7); (3) A-779组：加入10-6mol/L的A-779;(4) AngⅡ组：加入10-6mol/L的AngⅡ;(5) AngⅡ+Ang-(1-7)组：加入10-6mol/L的AngⅡ基础上,分别加入不同浓度的Ang-(1-7) (10-6～10-9mol/L); (6) AngⅡ+Ang-(1-7)+A-779组：用10-6mol/L的A-779预处理30min后,再用终浓度为10-6mol/LAng-(1-7)预处理30min,最后加入终浓度为10-6mol/LAngⅡ。干预16小时后收集细胞及培养液。采用流式细胞仪检测细胞内ROS的荧光强度,采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物岐化酶(SOD)的活力,用硫代巴比妥酸(Thibabituric Acid TB A)法测定MDA的含量。结果1.细胞形态观察：荧光显微镜下观察,AngⅡ组与对照组相比细胞绿色荧光强度明显增强,在AngⅡ基础上加入Ang-(1-7)后,绿色荧光强度较AngⅡ组相比明显减弱,Ang-(1-7)与A-779组与对照组相比均无明显差异。2.流式细胞仪检测结果流式细胞仪分析显示,Ang-(1-7) (10-6 mol/L)与A-779(10-6mol/L)组与对照组(38.9±3.5,39.2±2.8与39.3±2.2)相比P>0.05,无统计学意义,提示单独加入Ang-(1-7)和A-779对内皮细胞产生ROS没有影响；AngⅡ(10-6 mol/L)组与对照组(98.9±4.5与39.3±2.2)相比P<0.05,提示AngⅡ致细胞内ROS生成增加;AngⅡ+Ang-(1-7)组与AngⅡ组(43.7±2.3与98.9±4.5)相比P<0.05,提示Ang-(1-7)抑制了AngⅡ的促细胞ROS生成作用；AngⅡ+Ang-(1-7)+A-779组与AngⅡ+Ang-(1-7)组(78.2±4.3与43.7±2.3)相比P<0.05,提示Ang-(1-7)的作用被A-779阻断,Ang-(1-7)对AngⅡ的拮抗作用可能是MAS受体介导的；Ang-(1-7)不同浓度组间(77.5±2.7,68.1±2.5,55.2±3.2,43.7±2.3)相比P<0.05,提示Ang-(1-7)呈剂量依赖性抑制了AngⅡ的促ROS生成作用。3. Ang-(1-7) (10-6mol/L)与A-779 (10-6 mol/L)组与对照组(34.2±1.23,34.8±1.03,34.5±1.27)相比P>0.05,无统计学意义,提示单独加入Ang-(1-7)和A-779对内皮细胞的SOD活力没有影响；AngⅡ(10-6 mol/L)组与对照组(12.4±1.01与34.5±1.27)相比P<0.05,提示AngⅡ致细胞内SOD活力下降；AngⅡ+Ang-(1-7)组与AngⅡ组(30.9±0.79与12.4±1.01)相比P<0.05,提示Ang-(1-7)抑制了AngⅡ的致细胞SOD活力下降作用；AngⅡ+Ang-(1-7)+A-779组与AngⅡ+Ang-(1-7)组(19.2±0.87与30.9±0.79)相比P<0.05,提示Ang-(1-7)的作用被A-779阻断,Ang-(1-7)对AngⅡ的拮抗作用可能是MAS受体介导的；Ang-(1-7)不同浓度组间(17.3±0.78,22.9±0.87,27.3±0.67,30.9±0.79)相比P<0.05,提示Ang-(1-7)呈剂量依赖性抑制了AngⅡ致细胞内SOD活力下降作用。4. Ang-(1-7) (10-6mol/L)与A-779(10-6mol/L)组与对照组(11.02±0.33,10.09±0.41与10.08±0.32)相比P>0.05,无统计学意义,提示单独加入Ang-(1-7)和A-779对内皮细胞MDA的生成没有影响；AngⅡ(10-6mol/L)组与对照组(45.9±0.59,10.08±0.32)相比P<0.05,提示AngⅡ致内皮细胞MDA生成增加；AngⅡ+Ang-(1-7)组与AngⅡ组(18.9±0.43,45.9±0.59)相比P<0.05,提示Ang-(1-7)抑制了AngⅡ的促内皮细胞MDA生成作用；AngⅡ+Ang-(1-7)+A-779组与AngⅡ+Ang-(1-7)组(44.8±0.62,18.9±0.43)相比P<0.05,提示Ang-(1-7)的作用被A-779阻断,Ang-(1-7)对AngⅡ的拮抗作用可能是MAS受体介导的；Ang-(1-7)不同浓度组间(38.5±0.54,32.1±0.51,24.8±0.47,17.9±0.43)相比P<0.05,提示Ang-(1-7)呈剂量依赖性抑制了AngⅡ的致MDA生成作用。结论1. AngⅡ可以致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激。2.Ang-(1-7)呈剂量依赖性抑制AngⅡ致HUVECs氧化应激。3.A-779可以阻断Ang-(1-7)抑制AngⅡ致HUVECs氧化应激作用,提示Ang-(1-7)上述作用是通过特异性Mas受体介导。
