移植肾急慢性功能丧失与急性排斥炎细胞浸润相关性研究

本研究首先以大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）为研究对象，以大鼠胸腺T细胞为刺激因素，分别观察胸腺细胞直接诱导NRK-52E细胞的转分化现象以及体外激活的胸腺细胞诱导NRK-52E细胞的转分化功能。常规分离提取大鼠胸腺细胞，经流式细胞术抗原鉴定，所提取的细胞符合胸腺细胞特征。利用提取的胸腺细胞与NRK-52E细胞联合培养48小时后，显微镜下见NRK-52E细胞失去上皮细胞鹅卵石样形态，变为梭形细胞，real time-PCR和免疫荧光染色显示NRK-52E细胞失去了上皮细胞标记物E-Ca（E-钙粘蛋白），同时表达了间充质细胞标记物а-SMA（а-平滑肌动蛋白）、Vimentin（波形蛋白）和Desmin（结蛋白）。在上述研究的基础上，进一步利用经PHA（植物血凝素）和ConA（刀豆蛋白A）激活的大鼠胸腺细胞制备的诱导培养基诱导NRK-52E细胞48小时，显微镜下NRK-52E细胞也发生形态变化，即由典型上皮细胞鹅卵石样形态变为长梭形细胞。进一步检测细胞表型发现，NRK-52E细胞上皮细胞标记细胞角蛋白和E-Ca表达明显降低，而间充质细胞标记物а-SMA、Vimentin和Desmin的表达则明显升高。说明大鼠胸腺T细胞可以使体外培养NRK-52E细胞的上皮细胞标记物减少或丢失，同时出现间充质细胞标记物，即诱导NRK-52E细胞发生上皮—间充质细胞转分化，提示移植肾急性排斥反应“小管炎”中浸润的T细胞引起的肾小管上皮细胞损伤，可诱导肾小管上皮细胞发生转分化，进而参与移植肾慢性纤维化的形成。另外，我们还收集了五例移植后40天以内功能丧失的移植肾标本，常规病理检查明确诊断为急性抗体介导排斥反应的基础上，选用9种免疫细胞标记抗体，以免疫组织化学方法检测了早期功能丧失的移植肾病变组织中浸润的免疫细胞类型。发现在急性抗体介导排斥反应的动脉内膜炎中，以巨噬细胞和T细胞为最主要的浸润免疫细胞，其中CD8+细胞毒性T细胞占所浸润总T细胞的45.4%；在较严重的动脉内膜炎（V3）中，除巨噬细胞和T细胞外，中性粒细胞也占较高比率。在肾小球炎中，巨噬细胞占最高比率，其次的是中性粒细胞。NK细胞在动脉内膜炎和肾小球炎中也较易见到，很少有B细胞和浆细胞在这些组织损伤中出现。总之，本研究体外观察了大鼠胸腺T细胞诱导大鼠肾小管上皮细胞发生上皮-间充质细胞转分化的现象，并对急性抗体介导排斥反应导致的移植后早期功能丧失的病变组织中浸润的免疫细胞类型进行了全面系统的检测。期望能对移植肾急慢性功能丧失的机制研究提供实验依据。