连锁分析血管紧张素转换酶及缓激肽B2受体基因多态性与血管紧张素转换酶抑制剂所致咳嗽的关系

肽基二肽酶论文 缓激肽论文 基因论文 多态性论文
论文详情
目的:血管紧张素转换酶抑制剂(Angiotensin- converting enzyme inhibitors ACEI)已广泛应用于慢性心力衰竭、原发性高血压及心肌梗死的治疗。然而其副作用——咳嗽却在一定程度上限制了其应用。关于ACEI相关性咳嗽的发生机制尚未十分明确。为了探讨ACEI所致咳嗽副反应的遗传易感性,应用多聚酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)及单链构像多态性分析(Single-strand conformation polymorphism,SSCP)检测ACE基因插入/缺失(Insertion/deletion I/D)多态性与缓激肽B2受体基因启动子区-58T/C多态性,并连锁分析上述基因多态性与ACEI所致咳嗽的关系。方法:选择2001年6月至2002年12月住院并接受开搏通(卡托普利)治疗的高血压、心肌梗死及慢性稳定心衰患者145例。根据服药两周后有无咳嗽副反应的发生分为咳嗽组与无咳嗽组。所有患者均为汉族,无血缘关系,无近期烟史及呼吸道感染史,无慢性支气管炎及支气管哮喘等呼吸道疾病史。DNA提取:抽取外周静脉血4ml,0.2%枸橼酸钠抗凝,0.83%氯化铵分离提取白细胞。采用UNIQ-10柱式DNA抽提试剂盒提取基因组DNA(药盒购自上海生工),提取<WP=4>的基因组DNA置于-20℃冰箱保存,待测。ACE基因I/D多态性检测:用PCR法扩增ACE基因第16内含子目的片段,引物序列为:正向: 5’—CTGCAGACCACTCCCATCCTTTCT—3’,反向: 5’—GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT—3’。总反应体系50 ul (10×buffer 5ul, dNTP 200 umol/L,引物 0.4 umol/L,基因组DNA 0.1 ug, Taq酶2.5U, Mgcl2 1.5 mmol/L)。PCR扩增循环条件:94℃ 预变性2 min, 94℃ 变性 50 sec,55℃ 退火1 min,72℃ 延伸 1 min,共35个循环,最后一个循环72℃延伸5分钟。扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳,0.12%溴化乙锭染色后紫外灯下观察结果。缓激肽B2受体基因-58T/C多态性检测:首先PCR扩增目的基因片段,引物序列为:正向: 5’—GCAGAGCTCAGCTGGAGGAG—3’,反向: 5’—CCTCCTCGGAGCCCAGAAG—3’。总反应体系50 ul (10×buffer 5 ul, dNTP 200 umol/L,引物 0.4 umol/L,基因组DNA 0.1 ug, Taq酶 2.5U, Mgcl2 1.5 mmol/L)。循环条件如下: 94℃ 预变性 3分钟,94℃ 变性 1分钟,60℃ 退火 45秒,72℃ 延伸 1分钟,共35个循环,最后一个循环72℃延伸5分钟。PCR产物首先以1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定结果,而后行SSCP分析。即先将PCR产物5ul与等体积甲酰胺变性液混匀,于85℃-95℃沸水浴10分钟,迅速置于冰浴中。然后走20%聚丙烯酰胺凝胶电泳,电泳缓冲液为2×TBE,4℃电泳20小时。硝酸银染色鉴定结果,最后克隆测序,明确突变为腺嘌呤(Cytosine C)或胸腺嘧啶(Thymidine T)。<WP=5>应用SSPS10.0软件分析系统进行统计分析。结果:所有患者均按设计完成实验,其中27.59%(40/145)的患者发生了ACEI相关的咳嗽,而且咳嗽发生组中大部分患者为女性(26/40),男女之比约为1:2。1.ACE基因PCR扩增结果:PCR扩增产物呈两种带型:长度为490bp者,为插入型(I型);长度为190bp者,则为缺失型(D型)。群体中可表现为三种基因型即:缺失纯合子型(DD型),仅有190bp的电泳条带;插入纯合子型(II型),仅有490bp的带型; 插入/缺失杂合子型(I/D型),有490bp和190bp两种带型。2.缓激肽B2受体基因PCR-SSCP结果:PCR扩增结果于1.2%琼脂糖凝胶电泳下表现为122bp的电泳条带。经SSCP分析,聚丙烯酰胺凝胶电泳下表现为三种基因型,分别为:TT、TC和CC型。3. ACE基因I/D多态性基因型分布及基因频率比较:ACE基因型分布及基因频率符合hardy-weinberg平衡。咳嗽组中,II、ID、DD基因型分别为45.00%、35.00%、20.00%;而无咳嗽组中,上述基因型分别为33.33%、34.29%、32.38%。两组间比较无统计学差异(χ2=3.232, P>0.05),但咳嗽组的II基因型相对于无咳嗽组有增高趋势(45.00% vs 33.33%)。咳嗽组的I等位基因频率却明显高于无咳嗽组(χ2=4.135, P<0.05)。亚组分析显示:在女性患者中,咳嗽组中II基因型明显高于无咳嗽组(χ2=8.342, P<0.025)4.缓激肽B2受体基因-58T/C基因型分布及基因频率比较:基因型分布及基因频率符合hardy-weinberg平衡。咳嗽组中,TT、CT、CC基因型分别为30.00%、57.50%、<WP=6>12.50%;无咳嗽组中,上述基因型分别为22.86%、59.04%、18.10%。两组间无统计学差异(χ2=3.052, P>0.05)。咳嗽组的T等位基因频率却明显高于无咳嗽组(χ2=4.047, P<0.05)。 5.连锁分析ACE基因I/D多态性及缓激肽B2受体基因T/C多态性与咳嗽的关系:咳嗽组中同时具有ACE II与缓激肽B2受体TT基因型者比率明显高与无咳嗽组。(χ2=11.327, P<0.005),基因型为ACE II+缓激肽B2受体TT者,其发生ACEI相关性咳嗽的风险比(OR=13.574)明显高于单独具有ACE II基因型(OR=0.589)、缓激肽B2受体TT基因型(OR=0.250)及其他基因型组合者(OR=0.003)。结论:关于ACEI所致咳嗽的确切发病机制仍未十分明确。在中国汉族人群中,服用ACEI类药物后发生咳嗽副反应可能呈一定遗传易感性。同时具有ACE II基因型与缓激肽B2受体-58TT基因型者,其发生ACEI相关性咳嗽的风险远高于ACE I
中文摘要第3-7页
英文摘要第7-3页
研究论文第3-38页
    连锁分析血管紧张素转换酶及缓激肽B_2受体基因多态性与血管紧张素转换酶抑制剂所致咳嗽的关系第3-12页
    前言第12-14页
    材料与方法第14-18页
    结果第18-20页
    讨论第20-26页
    小结第26页
    参考文献第26-32页
    附表第32-35页
    附图第35-38页
综述 血管紧张素转换酶抑制剂所致咳嗽的病理生理及遗传学研究进展第38-50页
致谢第50-51页
个人简历第51页
论文购买
论文编号ABS1458251,这篇论文共51页
会员购买按0.30元/页下载,共需支付15.3
不是会员,注册会员
会员更优惠充值送钱
直接购买按0.5元/页下载,共需要支付25.5
只需这篇论文,无需注册!
直接网上支付,方便快捷!
相关论文

点击收藏 | 在线购卡 | 站内搜索 | 网站地图
版权所有 艾博士论文 Copyright(C) All Rights Reserved
版权申明:本文摘要目录由会员***投稿,艾博士论文编辑,如作者需要删除论文目录请通过QQ告知我们,承诺24小时内删除。
联系方式: QQ:277865656