共轭亚油酸诱导小鼠附睾脂肪减少发生机制的研究
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为了了解共轭亚油酸(CLA)诱导的动物脂肪减少的发生机制,本研究在两组(n=12)6周龄雄性昆明小鼠的日粮中分别添加1.5%的CLA(试验组)或亚油酸(LA,对照组),13天后麻醉处死采样,对附睾脂肪组织的分解、合成以及附睾脂肪细胞的分化与凋亡进行了研究。结果显示,与对照组相比,日粮中含有CLA的小鼠的采食量与体重无显著差异(P>0.05),但附睾脂肪组织含量及附睾脂肪组织中瘦素表达水平显著下降(P<0.01),小鼠出现胰岛素抵抗、高血脂以及脂肪细胞形态发生异常,以上结果表明CLA已成功诱导出脂肪营养不良的小鼠模型。荧光定量PCR和Western blotting检测发现,附睾脂肪组织中perilipin1的mRNA和蛋白质表达水平都显著下降。perilipin1的正调节因子过氧化物酶体增殖体激活受体γ(PPARγ)的mRNA表达水平显著下降(P<0.01),而perilipin1的负调节因子肿瘤坏死因子α(TNFα)的mRNA水平显著升高(P<0.01);荧光素酶报告基因系统检测发现,在3T3L1细胞的培养液中添加CLA能抑制perilipin1的启动子活性。为进一步研究perilipin1减少引起的功能变化,经小鼠附睾脂肪的体外培养试验发现,CLA能够增加脂肪组织的基础脂解率(P<0.01),但显著减弱脂肪组织在激素刺激下产生的脂解反应。因此CLA能够造成脂肪营养不良小鼠的脂肪组织中Perilipin1表达的下降并导致附睾脂肪组织的异常脂解,成为脂肪组织减少的原因之一。在脂肪合成的研究中,用荧光定量PCR分析脂肪合成的关键酶ACC、SCD、FAS以及它们的主要激活因子SREBP-1c的表达,结果发现ACC、SCD、SREBP1-C的表达下降(P<0.01),表明脂肪的从头合成受到抑制,荧光定量PCR对LPL的mRNA表达水平检测发现其mRNA表达也显著下降(P<0.01),表明血液中供应脂肪合成的原料短缺,造成脂肪合成减少。根据试验数据,试验组小鼠脂肪组织中的PPARγ的mRNA表达显著下降(P<0.01),脂肪细胞形态学异常,表明CLA还能够抑制脂肪细胞的正常分化。最后通过检测了小鼠附睾脂肪细胞胞浆中Caspase3/7的活性来鉴定脂肪细胞的凋亡情况,结果表明CLA能够促进脂肪细胞的凋亡。结论:共轭亚油酸通过影响脂肪细胞的脂解、脂肪的合成、脂肪细胞的分化与凋亡这四种生物学活性,导致小鼠的脂肪减少。
致谢 | 第4-7页 |
摘要 | 第7-8页 |
1 文献综述 | 第8-20页 |
1.1 共轭亚油酸的生理学功能以及对健康的重要意义 | 第8-11页 |
1.1.1 CLA 结构与来源 | 第8-10页 |
1.1.2 CLA 对机体脂肪含量的影响 | 第10-11页 |
1.2 脂肪营养不良的类型与特点 | 第11-13页 |
1.2.1 全身性脂肪营养不良 | 第12页 |
1.2.2 部分性脂肪营养不良 | 第12-13页 |
1.3 脂肪组织含量的主要影响因素 | 第13-20页 |
1.3.1 围脂滴蛋白在脂肪分解中的重要作用 | 第13-17页 |
1.3.2 脂肪合成的关键酶与调节因子 | 第17-18页 |
1.3.3 PPARγ在脂肪细胞分化中的作用 | 第18-19页 |
1.3.4 Caspase3/7 在脂肪细胞凋亡中的作用 | 第19-20页 |
2 引言 | 第20-21页 |
3 材料与方法 | 第21-32页 |
3.1 材料 | 第21-22页 |
3.1.1 试验动物 | 第21页 |
3.1.2 仪器 | 第21-22页 |
3.1.3 试剂与抗体 | 第22页 |
3.2 试验方法 | 第22-31页 |
3.2.1 试验饲料的配制 | 第22页 |
3.2.2 试验小鼠采食量、体重以及胰岛素耐受 | 第22-23页 |
3.2.3 CLA 小鼠血脂以及附睾脂肪含量的检测 | 第23页 |
3.2.4 脂肪细胞的组织形态学检测 | 第23-24页 |
3.2.5 Quantitative RT-PCR 对脂肪组织合成与代谢相关基因表达的检测 | 第24-25页 |
3.2.6 脂肪组织脂解水平的检测 | 第25-26页 |
3.2.7 Western Blotting 对 Perilipin1 蛋白表达的检测 | 第26-27页 |
3.2.8 脂肪细胞凋亡的检测 | 第27-28页 |
3.2.9 荧光素酶报告基因系统对 perilipin1 启动子活性的检测 | 第28-31页 |
3.3 数据处理 | 第31-32页 |
4 结果与分析 | 第32-43页 |
4.1 CLA 对小鼠采食量和体重的影响 | 第32页 |
4.2 CLA 对小鼠胰岛素耐受与血脂的影响 | 第32页 |
4.3 CLA 小鼠脂肪含量的影响 | 第32页 |
4.4 CLA 对小鼠脂肪细胞形态的影响 | 第32-37页 |
4.5 CLA 对脂肪细胞的脂解的影响 | 第37页 |
4.6 CLA 对 perilipin 1 表达的影响 | 第37页 |
4.7 CLA 对 perilipin1 启动子活性的影响 | 第37页 |
4.8 CLA 对脂肪合成相关指标的影响 | 第37页 |
4.9 CLA 对脂肪细胞分化与凋亡的影响 | 第37-43页 |
5 结论 | 第43-44页 |
6 讨论 | 第44-47页 |
参考文献 | 第47-57页 |
英文摘要 | 第57-58页 |
发表论文及论著情况: | 第59页 |
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