背景和目的目前认为,动脉粥样硬化(AS)是一种慢性炎症过程。内皮细胞损伤和单核细胞与内皮细胞黏附是AS发生的重要始动环节。细胞间黏附分子-1(intercellular adhesionmolecule-1,ICAM-1)和血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)是存在于内皮细胞表面的一种重要的黏附分子,主要介导单核细胞与内皮细胞黏附,从而引发动脉粥样硬化。血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)是肾素-血管紧张素系统的重要活性物质,研究表明AngⅡ可刺激内皮细胞ICAM-1和VCAM-1的表达,在AS的发生中起关键作用。血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]是肾素-血管紧张素系统的新成员,具有降低血压、抗增生、利钠利尿等拮抗AngⅡ的作用。但Ang-(1-7)能否对抗AngⅡ刺激内皮细胞表达粘附分子的作用,国内外未见相关文献报道。本实验通过体外培养的脐静脉内皮细胞,采用ELISA法和半定量RT-PCR法从蛋白和mRNA水平检测ICAM-1和VCAM-1的表达,观察Ang-(1-7)对AngⅡ诱导的脐静脉内皮细胞黏附分子的影响。阐明Ang-(1-7)对AngⅡ在炎症方面的拮抗作用,揭示Ang-(1-7)拮抗AngⅡ作用的另一新途径,为临床心血管疾病的防治提供理论依据。方法1、脐静脉内皮细胞培养鉴定。2、试验分组(1)对照组培养液不加干扰因素;(2)AngⅡ组加入AngⅡ100nmol/L;(3)Ang-(1-7)组加入Ang-(1-7)1000nmol/L;(4)AngⅡ+Ang-(1-7)组分别用Ang-(1-7)10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L、10000nmol/L预处理30min后,再加入AngⅡ100nmol/L;(5)AngⅡ+Ang-(1-7)+A-779组先用1000nmol/L A-779预处理30min后,再用终浓度为1000nmol/L Ang-(1-7)预处理30min,最后加入终浓度100nmol/L AngⅡ。3、各组用ELISA法和半定量RT-PCR法从蛋白和mRNA水平检测ICAM-1和VCAM-1的表达情况。结果1、正常细胞生长良好,呈鹅卵石样镶嵌排列,细胞透明度大,轮廓不清。荧光免疫组化染色法,可检测到培养的HUVEC的Ⅷ因子相关抗原为阳性。2、与对照组比,AngⅡ(100nmol/L)使ICAM-1和VCAM-1的分泌量明显增加,ICAM-1和VCAM-1 mRNA的表达显著升高(P＜0.05);Ang-(1-7)(1000nmol/L)使ICAM-1和VCAM-1的分泌量降低,ICAM-1和VCAM-1 mRNA表达亦降低(P＜0.05);3、混合刺激组中,与AngⅡ组比较,Ang-(1-7)(10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L、10000 nmol/L)呈剂量依赖性的抑制AngⅡ刺激ICAM-1、VCAM-1的分泌和ICAM-1、VCAM-1 mRNA的表达(P＜0.05),Ang-(1-7)浓度为1000nmol/L时,虽然蛋白和mRNA表达仍高于对照组,但无统计学意义(P＞0.05);4、加入A-779后,Ang-(1-7)的作用消失。结论1、AngⅡ可使内皮细胞ICAM-1和VCAM-1的分泌量明显增加。2、Ang-(1-7)可使内皮细胞ICAM-1和VCAM-1的分泌量减低。3、Ang-(1-7)可以拮抗AngⅡ诱导的脐静脉内皮细胞ICAM-1和VCAM-1表达,并呈浓度依赖性。4、Ang-(1-7)上述作用通过其特异性受体MAS发挥作用。
