LHA-DVC Orexin-A通路构成及对胃牵张敏感神经元放电活动和胃运动调控研究

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目的:Orexin-A作为一种新型神经肽,具有广泛的生理作用,可调节摄食、能量代谢、睡眠-觉醒及胃肠运动等生理活动,但orexin-A对胃运动调控机制还未明确。本实验拟通过观察orexin-A对大鼠迷走神经复合体(DVC)胃牵张敏感神经元(GD)放电活动的影响,以及下丘脑外侧区(LHA)对其调控作用,并通过逆行追踪结合免疫组化实验进一步阐述LHA-DVC间可能存在orexin-A神经及功能通路。方法:逆行追踪技术结合荧光免疫组化染色,观察LHA-DVC间orexin-A神经通路的构成;采用细胞外放电记录,观察DVC微量注射orexin-A对GD放电活动的影响及可能机制;通过在体胃运动研究,观察DVC微量注射orexin-A对清醒自由活动大鼠胃收缩幅度和频率的影响,以及对大鼠胃液及胃酸分泌的影响及机制。结果:逆行追踪结合免疫荧光染色研究发现,LHA内有orexin-A/荧光金(FG)双标神经元;电生理实验显示,DVC内共记录到96个GD敏感神经元,其中58个为GD-E神经元,38个为GD-I神经元。DVC微量注射orexin-A,有36个GD-E神经元放电频率明显增强(P<0.01),而24个GD-I神经元放电频率明显减弱(P<0.01);大鼠DVC内预先微量注射orexin-A选择性受体拮抗剂SB334867,orexin-A对GD-E神经元放电兴奋效应可被完全阻断(P<0.05),同样,对GD-I神经元放电抑制效应也可被完全阻断(P<0.05)。电刺激LHA,在DVC记录到的36个orexin-A敏感性GD-E神经元中有24个放电频率显著增加(P<0.05);而24个orexin-A敏感性GD-I神经元中16个放电频率也增加(P<0.05)。但预先DVC内注射SB334867,再电刺激LHA,GD-E神经元放电频率较前明显下降(P<0.01),GD-I神经元放电频率也显著降低(P<0.05)。在体胃运动研究结果显示,DVC微量注射orexin-A,大鼠胃收缩幅度以及收缩频率明显升高,且呈明显剂量依赖关系(P<0.05)。SB334867可显著阻断orexin-A对促胃运动效应(P<0.05)。电刺激LHA,大鼠胃运动显著增强(P<0.01);DVC微量注射orexin-A,大鼠胃液及胃酸分泌且呈剂量依赖性增加(P<0.05)。结论:Orexin-A可影响大鼠胃牵张敏感神经元放电活动,以及胃运动和胃酸分泌,该效应可能通过Orexin-A受体通路调控。
摘要第2-3页
Abstract第3-4页
引言第6-8页
第一章 材料与方法第8-15页
    1.1 实验材料第8-10页
        1.1.1 实验动物第8页
        1.1.2 实验仪器第8页
        1.1.3 实验药品第8-9页
        1.1.4 试剂配制第9-10页
    1.2 实验方法第10-14页
        1.2.1 逆行追踪实验第10-12页
        1.2.2 电生理实验第12-13页
        1.2.3 胃运动实验第13-14页
        1.2.4 胃液及胃酸实验第14页
        1.2.5 电刺激LHA第14页
        1.2.6 组织学检查第14页
    1.3 统计学分析第14-15页
第二章 实验结果第15-26页
    2.1 下丘脑外侧区-迷走神经复合体orexin-A神经纤维投射第15页
    2.2 DVC微量注射orexin-A对GD神经元放电活动的影响第15-17页
    2.3 电刺激LHA对DVC orexin-A敏感性GD神经元放电活动的影响第17-19页
    2.4 DVC微量注射orexin-A对大鼠胃运动的影响第19-21页
    2.5 DVC微量注射SB334867对电刺激LHA诱导的胃运动的影响第21-24页
    2.6 DVC微量注射orexin-A对大鼠胃液及胃酸分泌的影响第24-26页
第三章 讨论第26-28页
结论第28-29页
参考文献第29-33页
综述第33-59页
    参考文献第45-59页
致谢第59-60页
攻读学位期间研究成果第60-61页
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