第一部分当归A3部位的抗炎作用及其对大鼠子宫Cox-2表达的影响当归A3部位（简称A3）是我系从当归挥发油（CO2超临界法提取）中萃取得到的中性、非酚性部位。实验证明当归挥发油具有抗炎镇痛作用,且其抗炎作用与抑制PGs生成有关。我们前期的研究发现:A3为当归挥发油中最佳抑制子宫收缩、抗痛经活性部位,其抑制子宫收缩机制可能与抑制PGs生成有关。本部分拟先建立炎症模型研究A3的抗炎作用,然后进一步研究其对Cox-2表达的影响,探讨其抗炎抗痛经的作用机制,为将其开发成新药提供理论和实验依据。§1 A3对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响方法:连续灌胃给药3天（1次/天）后,采用二甲苯制备小鼠耳廓肿胀的炎症模型,观察二甲苯致炎后1 h药物对小鼠耳肿胀的影响。结果:A3 0.001 g/kg、0.005 g/kg和0.01 g/kg可剂量依赖性地抑制小鼠耳廓肿胀,抑制率分别为10.6%、21.1%和53% （ n=10）。当归挥发油0.1 g/kg的抑制率为51.3%。A3 0.01 g/kg抑制小鼠耳廓肿胀作用与当归挥发油0.1 g/kg的作用相当。§2 A3对角叉菜胶所致大鼠足肿胀的影响方法:连续灌胃给药4天（1次/天）后,采用角叉菜胶制备大鼠足趾肿胀的炎症模型,观察角叉菜胶致炎后1,2,4,6 h药物对大鼠足趾肿胀的影响。结果:A3（0.001, 0.005, 0.01 g/kg）可剂量依赖性抑制角叉菜胶所致大鼠足趾肿胀,致炎后1 h足肿胀度由对照0.224±0.032 cm降至0.204±0.060,0.171±0.053和0.126±0.061 cm（n=8, P >0.05,P <0.05,P <0.01）。当归挥发油0.1 g/kg组的足趾肿胀度为0.171±0.041 cm。A3 0.005 g/kg抑制足趾肿胀作用与当归挥发油0.1 g/kg作用相当。§3 A3对大鼠子宫Cox-2 mRNA表达的影响方法:采用RT-PCR法检测子宫Cox-2 mRNA的表达结果:LPS 1μg/mL可显著增加离体大鼠子宫Cox-2 mRNA的表达水平。A3 （10,20,40,80,160,320 mg/L）剂量依赖性地抑制LPS诱导的子宫Cox-2 mRNA表达水平增高,光密度比值分别从0.462±0.164下降至0.408±0.136,0.368±0.126,0.306±0.065,0.250±0.084,0.138±0.016和0.008±0.003（n=8）。§4 A3对大鼠子宫Cox-2蛋白表达的影响方法:采用Western blot法检测Cox-2蛋白表达水平结果:LPS 1μg/mL可显著增加离体大鼠子宫Cox-2蛋白的表达水平。A3 （10,20,40,80,160,320 mg/L）剂量依赖性地抑制LPS诱导的子宫Cox-2蛋白表达水平增高,灰度值分别从187.8±13.5依次下降至162.6±16.3,155.0±17.0,148.4±14.3,133.6±13.3,125±15.4和119.4±14.4 （n=8）结论1. A3可显著抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀和角叉菜胶所致的大鼠足趾肿胀,且A3 0.01 g/kg抑制耳廓肿胀度和A3 0.005 g/kg 1 h抑制足趾肿胀度分别与当归挥发油0.1 g/kg抑制度相当,提示A3具有强大的抗炎作用。2. A3可剂量依赖性地抑制LPS诱导的大鼠子宫Cox-2 mRNA及蛋白表达增加,提示A3可通过下调子宫组织中Cox-2的表达来减少PGs（包括PGF2α）的生物合成,从而发挥抗炎抗痛经作用。第二部分二苯乙烯苷对HUVEC eNOS表达的影响二苯乙烯苷（2,3,5,4’-tetrahydroxystilbene-2-O-beta-D-glucoside,THSG）是从中药何首乌中提取的一种活性成分,已证实其对离体血管具有内皮依赖性舒张作用,且与增强一氧化氮合酶（nitric oxide synthase ,NOS）活性和增加一氧化氮（nitric oxide,NO）的含量有关。同时发现THSG也能增强人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells ,HUVEC）内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase ,eNOS）活性和增加NO产量,本部分进一步研究THSG对eNOS mRNA和蛋白表达的影响,以期阐述THSG增加NO产量、舒张血管的作用机制。§1 THSG对HUVEC eNOS mRNA表达的影响方法:采用RT-PCR法检测HUVEC eNOS mRNA表达结果:用不同浓度（1,3,10,30,100μmol/L）THSG孵育HUVEC 24 h后,提取细胞总RNA进行RT-PCR。结果显示THSG增强eNOS mRNA表达呈浓度依赖性。孵育24 h后,1μmol/L THSG即可使eNOS mRNA水平增加（P<0.05）。10μmol/L THSG使eNOS mRNA水平显著增加（P<0.01）,平均光密度比值为对照组的1.9倍。用10μmol/L THSG孵育HUVEC 12,24,36,48 h后提取RNA进行RT-PCR ,结果显示THSG增强eNOS mRNA表达呈时间依赖性,10μmol/L THSG孵育12 h后,eNOS mRNA表达水平增高即有显著差异（P<0.05）,24 h达高峰（P<0.01）,48 h仍高于正常（P<0.01）。§2 THSG对HUVEC eNOS蛋白表达的影响方法:采用Western blot法检测HUVEC eNOS蛋白表达水平结果:用不同浓度（1,3,10,30,100μmol/L）THSG孵育HUVEC 48 h后,提取细胞总蛋白进行Western blot。结果显示THSG增强eNOS蛋白表达呈浓度依赖性。孵育48 h后,1μmol/L THSG即可使eNOS蛋白水平增加（P<0.05）。10μmol/L THSG使eNOS蛋白水平显著增加（P<0.01）,平均灰度比值为对照组的1.8倍。用10μmol/L THSG孵育HUVEC 12,24,36,48 h后提取蛋白进行Western blot,结果显示THSG增强eNOS蛋白表达呈时间依赖性,10μmol/L THSG孵育12 h后, eNOS蛋白表达水平即有增高趋势（P > 0.05）。24 h出现显著性差异（P<0.01）,48 h仍高于正常（P<0.01）。结论THSG能增强HUVEC eNOS mRNA和蛋白表达水平,提示THSG可通过上调血管内皮细胞中eNOS表达来增多NO产量,从而发挥舒张血管的作用。
