大豆疫霉有丝分裂S期激酶蛋白相关基因PsSkp1克隆与功能分析
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论文详情
| 致谢 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 1 文献综述 | 第9-15页 |
| 1.1 卵菌概述 | 第9-10页 |
| 1.2 大豆疫霉概述 | 第10-12页 |
| 1.3 细胞有丝分裂S期激酶相关蛋白Skp1的概述 | 第12页 |
| 1.4 RNA干扰技术介绍 | 第12-13页 |
| 1.5 RNAi效用机理 | 第13页 |
| 1.6 RNA干扰技术与基因敲出技术的比较 | 第13-14页 |
| 1.7 RNA干扰技术在疫霉基因功能研究中的应用 | 第14页 |
| 1.8 有丝分裂S期激酶相关蛋白Skp1研究进展 | 第14-15页 |
| 2 引言 | 第15-17页 |
| 3 材料与方法 | 第17-22页 |
| 3.1 实验材料 | 第17-18页 |
| 3.1.1 供试菌株和载体 | 第17页 |
| 3.1.2 供试大豆品种 | 第17页 |
| 3.1.3 培养基 | 第17页 |
| 3.1.4 主要试剂 | 第17页 |
| 3.1.5 主要实验仪器 | 第17-18页 |
| 3.2 实验方法 | 第18页 |
| 3.2.1 大肠杆菌DH5a/JM109感受态细胞的制备 | 第18页 |
| 3.2.2 RNA的提取 | 第18页 |
| 3.2.3 基因组DNA的提取 | 第18页 |
| 3.3 试验方法 | 第18-22页 |
| 3.3.1 目的基因扩增引物设计 | 第18页 |
| 3.3.2 6497 菌株RNA的提取 | 第18-19页 |
| 3.3.3 反转录cDNA第一链的合成 | 第19页 |
| 3.3.4 PsSkp1部分基因片段的扩增 | 第19-20页 |
| 3.3.5 PsSkp1-T载体的构建 | 第20页 |
| 3.3.6 pTOR-Skp1-GFP沉默载体验证正反向引物设计 | 第20页 |
| 3.3.7 pTOR-GFP质粒的提取 | 第20页 |
| 3.3.8 pTOR-Skp1-GFP反向沉默载体的构建 | 第20页 |
| 3.3.9 大豆疫霉PEG介导的原生质体稳定转化 | 第20-21页 |
| 3.3.10 各个沉默突变菌株PsSkp1表达量qRT-PCR分析 | 第21页 |
| 3.3.11 PsSkp1沉默突变菌株相关表型分析 | 第21页 |
| 3.3.12 PsSkp1沉默突变菌株的致病性研究 | 第21-22页 |
| 4 结果与分析 | 第22-33页 |
| 4.1 Skp1基因片段的扩增和回收 | 第22-25页 |
| 4.1.1 PsSkp1氨基酸序列分析 | 第22-24页 |
| 4.1.2 Skp1基因片段的扩增和回收 | 第24-25页 |
| 4.1.3 T-载体的构建 | 第25页 |
| 4.2 反向插入的沉默表达载体的验证 | 第25页 |
| 4.3 PsSkp1反向插入沉默突变菌株的筛选 | 第25-26页 |
| 4.4 PsSkp1沉默突变菌株的表型分析 | 第26-28页 |
| 4.4.1 PsSkp1沉默突变菌株的胁迫试验测定结果 | 第26-27页 |
| 4.4.2 PsSkp1沉默突变菌株菌丝形态变化 | 第27-28页 |
| 4.5 PsSkp1沉默突变菌株的致病力测定 | 第28-31页 |
| 4.5.1 PsSkp1沉默突变菌株菌丝侵染能力测定 | 第28-29页 |
| 4.5.2 PsSkp1沉默突变菌株菌丝致病性测定 | 第29-30页 |
| 4.5.3 PsSkp1沉默突变菌株孢子囊的产生和游动孢子释放差异 | 第30-31页 |
| 4.6 PsSkp1沉默转突变菌株游动孢子的致病性分析 | 第31-33页 |
| 5 讨论 | 第33-34页 |
| 6 结论 | 第34-35页 |
| 参考文献 | 第35-38页 |
| 作者简介 | 第38页 |
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