微生态制剂具有无毒副作用、无残留和不产生抗药性等优点,成为抗生素的替代品,是当前国内外研究的热点。大量研究表明,乳酸菌、芽孢杆菌产生的有机酸及其代谢产物对一些病原菌有抑制作用,并能激活免疫活性细胞,增强机体免疫力;酵母培养物营养丰富,可促进有益菌的生长、抑制病原菌的繁殖,提高机体免疫能力,并对防治畜禽消化道系统疾病起到有益作用。本课题选择对机体免疫力有增强作用的乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌制成复合微生态制剂,验证其对反刍动物免疫机能的影响,为微生态制剂的研究与开发及在反刍动物中的应用提供科学依据。本课题将枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、粪肠球菌、啤酒酵母、酿酒酵母和产朊假丝酵母作为预选菌株,进行相互拮抗性试验、毒性试验、耐酸耐胆盐试验、拮抗病原菌试验,筛选对反刍动物消化道胃酸及胆盐耐受力强、且拮抗常见病原菌的菌株。进一步对筛选出菌株的培养基组分及发酵条件进行优化,采用固体混合发酵法制备复合微生态制剂。饲喂试验中,试验组绵羊的基础日粮中添加5%的复合微生态制剂,42天后采血,进行吞噬细胞的吞噬功能和口蹄疫效价测定。研究结果表明:七株预选菌株相互均不拮抗且对动物安全可靠,对酸性环境有一定的耐受性,其中枯草芽孢杆菌、嗜热链球菌、粪肠球菌、酿酒酵母和产朊假丝酵母对胆盐的耐受力较强,且对大肠杆菌、金黄葡萄球菌均有不同程度的抑制作用;故选择这五株菌为研制复合微生态制剂的理想菌株。筛选出的固体发酵培养基组分为:麸皮60%、豆粕20%、玉米粉15%、葡萄糖2%、明胶3%。发酵条件优化结果为:发酵温度34.5℃;发酵时间28h;接种顺序先接种嗜热链球菌、粪肠球菌、酿酒酵母、产朊假丝酵母发酵6h,再接种枯草芽孢杆菌发酵22h;接种量均为5%,制剂干燥温度为55℃,室温下避光保存,保存期不超过60d。吞噬调理试验结果表明,加入试验组羊全血后,大肠杆菌、金黄色葡萄球菌菌落数较对照组明显减少,表明饲喂本制剂能提高绵羊吞噬细胞的吞噬功能,进而增强动物机体免疫功能及抗病能力;口蹄疫效价测定结果表明,试验组绵羊循环血液中的口蹄疫抗体效价高于对照组,表明本制剂能提高反刍动物循环血液中的抗体水平,对体液免疫有增强作用。
