牦牛A-FABP、H-FABP基因多态性及与胴体和肉质性状关联性分析

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A-FABP和H-FABP蛋白属脂肪酸结合蛋白超家族(FABPs),参与调节哺乳动物细胞内脂肪浓度,进而影响肌肉内脂肪含量(IMF);H-FABP和A-FABP基因为肌内脂肪沉积的候选基因,对牛肉品质有重要作用。本研究采用PCR-SSCP技术检测甘南牦牛、青海牦牛、天祝白牦牛、野血牦牛及黄牛A-FABP和H-FABP基因部分区段单核苷酸多态性(SNPs),分析其分子遗传特征;运用最小二乘法分析A-FABP和H-FABP基因多态性对甘南牦牛部分肉用性状的影响,探讨其作为甘南牦牛胴体及肉质性状候选基因的可能性。主要研究结论如下:甘南牦牛、青海牦牛和天祝白牦牛A-FABP基因引物扩增区域发现5种等位基因A-E;同普通牛A-FABP基因序列比对发现6处SNPs,其中第4外显子区存在c.4222A>G的同义突变;3’-UTR区c.*94T>A突变仅存在于牦牛群体中,是其区别于普通牛的遗传特征之一;牦牛群体间各等位基因频率差异较大,其中天祝白牦牛只发现3种等位基因,而青海牦牛发现4种等位基因,这可能与牦牛类群的地域分布及选育程度有关。基因型与甘南牦牛胴体及肉质性状的关联性分析表明,2.5-3岁甘南牦牛AA型个体胴体重显著高于AC型(P<0.05),4.5-5岁AA型嫩度极显著高于BB型(P<0.01),AA型胴体重显著高于AB型(P<0.05)。A-FABP基因突变可作为牦牛胴体及肉质性状潜在分子标记位点。甘南牦牛、青海牦牛、天祝白牦牛、野血牦牛及黄牛H-FABP基因引物扩增区域发现3种等位基因A-C,与等位基因A比对,5’-UTR区存在c.17-2C>T的颠换,等位基因C在第1内含子还存在c.17+120G>A的转换。基因型与甘南牦牛胴体及肉质性状关联分析表明,3-3.5岁甘南牦牛BB型个体眼肌面积显著高于AA型(P<0.05);4.5-5岁AB型胴体重极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)高于AA型、BB型和BC型,眼肌面积分别极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)高于AA型,AA型熟肉率显著高于AB型(P<0.05),BC型眼肌面积极显著高于AA型(P<0.01)。H-FABP基因突变也可作为牦牛胴体及肉质性状潜在的分子标记位点。应用PCR产物混合样本DNA池法检测甘南牦牛H-FABP基因CDS区多态性并进行生物信息学分析。与普通牛比对,甘南牦牛H-FABP基因第3外显子存在*76G>A的同义突变;H-FABP基因编码产物二级结构是以α-螺旋和β-折叠为主的mixed型,氨基酸序列没有明显的疏水性区域,也未形成跨膜螺旋区及信号肽,推测主要在细胞质中发挥生物学作用。
摘要第4-6页
Summary第6-7页
第一部分 文献综述第10-19页
    1 FABPS 概述第10-13页
        1.1 FABPs 基因家族第10-11页
        1.2 FABP 基因的结构第11-12页
        1.3 FABPs 的蛋白结构和功能第12-13页
    2 H-FABP、A-FABP 基因及其与肉质性状的研究进展第13-16页
        2.1 心脏型脂肪酸结合蛋白(H‐FABP)第13-15页
            2.1.1 H‐FABP 基因的结构第14页
            2.1.2 H‐FABP 基因的研究进展第14-15页
        2.2 脂肪型脂肪酸结合蛋白(A‐FABP)第15-16页
            2.2.1 A‐FABP 基因的结构第15-16页
            2.2.2 A‐FABP 基因研究进展第16页
    3 PCR-SSCP 分析技术概述第16-19页
        3.1 PCR‐SSCP 技术的原理第16-17页
        3.2 PCR‐SSCP 技术的产生及建立第17页
        3.3 PCR‐SSCP 技术路线第17-19页
第二部分 牦牛 A‐FABP、H‐FABP 基因多态性及其与胴体和肉质性状的关联分析第19-47页
    1 材料与方法第19-27页
        1.1 试验材料第19页
        1.2 试验所用仪器、设备及溶液配制第19页
            1.2.1 试验仪器及设备第19页
            1.2.2 主要试剂及其配制第19页
        1.3 试验方法第19-26页
            1.3.1 甘南牦牛肉质性状测定第19-20页
            1.3.2 基因组 DNA 提取第20-21页
            1.3.3 PCR 扩增体系第21-22页
            1.3.4 扩增产物 PCR‐SSCP 分析第22-23页
            1.3.5 基因的克隆测序第23-25页
            1.3.6 DNA 池测序第25-26页
        1.4 数据统计分析第26-27页
    2 结果与分析第27-41页
        2.1 牦牛 A‐FABP 基因的 PCR‐SSCP 分析第27-32页
            2.1.1 牦牛 A‐FABP 基因的 PCR 扩增第27-28页
            2.1.2 牦牛 A‐FABP 基因 PCR‐SSCP 分析第28页
            2.1.3 牦牛 A‐FABP 基因不同等位基因序列比对第28-29页
            2.1.4 基因频率和基因型频率第29-30页
            2.1.5 牦牛 A‐FABP 基因的纯合度、杂合度、有效等位基因数和多态信息含量第30页
            2.1.6 甘南牦牛 A‐FABP 基因多态性与肉质性状的关联性分析第30-32页
        2.2 牦牛 H‐FABP 基因的 PCR‐SSCP 分析第32-35页
            2.2.1 牦牛 H‐FABP 基因的 PCR 扩增第32页
            2.2.2 牦牛 H‐FABP 基因第 1 外显子的 PCR‐SSCP 分析第32页
            2.2.3 牦牛 H‐FABP 基因检测区域等位基因序列比对第32-33页
            2.2.4 基因频率和基因型频率第33-34页
            2.2.5 牦牛 H‐FABP 基因第 1 外显子纯合度、杂合度、有效等位基因数和多态信息含量第34页
            2.2.6 甘南牦牛 H‐FABP 基因突变与肉质性状的关联性分析第34-35页
        2.3 甘南牦牛 H‐FABP 蛋白的生物信息学分析第35-41页
            2.3.1 甘南牦牛 H‐FABP 基因第 1‐4 外显子 PCR 扩增结果第35-36页
            2.3.2 甘南牦牛 H‐FABP 基因 CDS 区序列比对分析第36页
            2.3.3 甘南牦牛 H‐FABP 氨基酸序列推导第36-37页
            2.3.4 甘南牦牛 H‐FABP 氨基酸序列理化特性预测与分析第37页
            2.3.5 甘南牦牛 H‐FABP 氨基酸序列亲水性/疏水性预测与分析第37-38页
            2.3.6 甘南牦牛 H‐FABP 氨基酸序列跨膜区预测与分析第38页
            2.3.7 甘南牦牛 H‐FABP 氨基酸序列信号肽预测与分析第38-39页
            2.3.8 甘南牦牛 H‐FABP 的亚细胞定位预测与分析第39页
            2.3.9 甘南牦牛 H‐FABP 二级及三级结构预测与分析第39-40页
            2.3.10 甘南牦牛 H‐FABP 氨基酸序列同源性及系统发育分析第40-41页
    3 讨论第41-46页
        3.1 牦牛 A‐FABP 基因及 H‐FABP 基因检测区域的遗传特征第41-43页
            3.1.1 牦牛 A‐FABP 基因检测区域的遗传特征第41-42页
            3.1.2 牦牛 H‐FABP 基因检测区域的遗传特征第42-43页
        3.2 甘南牦牛 A‐FABP 及 H‐FABP 基因变异影响部分年龄段个体的胴体及肉质性状第43-44页
            3.2.1 甘南牦牛 A‐FABP 基因变异影响部分年龄段个体胴体重及嫩度第43页
            3.2.2 甘南牦牛 H‐FABP 基因变异影响部分年龄段个体胴体重和眼肌面积第43-44页
        3.3 甘南牦牛 H‐FABP 蛋白功能分析第44-45页
        3.4 甘南牦牛 H‐FABP 氨基酸序列同源性及系统发育分析第45-46页
    4 结论第46-47页
附录第47-50页
参考文献第50-56页
致谢第56-57页
作者简介第57-58页
导师简介第58-59页
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