优化徐淮白山羊卵母细胞体外成熟及其受精卵体外培养体系的研究
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本文研究了肝素、采卵季节、激素以及不同细胞因子对徐淮白山羊卵母细胞体外成熟、体外受精及其受精卵体外培养的影响,主要结果如下:1.在BO液中添加浓度为10μg/mL的肝素诱导徐淮白山羊精子体外获能,对卵母细胞的体外受精最有利。2.与10~1月份相比,3~6月份的徐淮白山羊卵巢可采集到更多的可用卵母细胞。季节对徐淮白山羊卵母细胞的体外成熟有显著的影响(P<0.05),3~6月份卵母细胞的成熟率更高,而对卵母细胞的体外受精则无显著的影响(P>0.05)。3.在徐淮白山羊卵母细胞成熟培养液中添加激素能有效提高成熟率、2-cell率(P<0.01)和囊胚率(P<0.05),添加10单位/mL FSH、30单位/mL LH和lμg/mL E2时的效果最好。4.在徐淮白山羊成熟培养液和受精卵培养液中,试验组单独添加不同浓度的GDNF、LIF、SCF与对照组相比其成熟率、2-cell率、4~16-cell率和囊胚率差异极显著(P<0.01)。添加LIF组对山羊早期胚胎的发育都好于SCF组、GDNF组。但从整体看分别添加15 ng/mL的GDNF组、10 ng/mL的LIF组、10 ng/mL的SCF组的效果最好。5.三种细胞因子间存在协同作用,有效地促进了徐淮白山羊卵母细胞体外成熟和胚胎的早期发育,在成熟培养液和受精卵培养液中添加浓度为10 ng/mL LIF、10 ng/mL SCF、10 ng/mL GDNF组能有效提高卵母细胞的成熟率和早期胚胎的发育潜能。
缩略语表 | 第5-7页 |
中文摘要 | 第7-8页 |
英文摘要 | 第8-9页 |
前言 | 第10-32页 |
1 哺乳动物卵母细胞体外成熟研究进展 | 第10-18页 |
1.1 卵母细胞的成熟过程 | 第10-11页 |
1.2 卵母细胞成熟的调节 | 第11页 |
1.3 卵母细胞体外成熟的研究现状 | 第11-12页 |
1.4 影响卵母细胞体外成熟的因素 | 第12-18页 |
2 哺乳动物体外受精的研究进展 | 第18-27页 |
2.1 体外受精的研究概况 | 第19-23页 |
2.2 影响体外受精效果的主要因素 | 第23-27页 |
3 哺乳动物胚胎体外培养的研究进展 | 第27-31页 |
3.1 胚胎体外培养的研究进展 | 第27-28页 |
3.2 影响胚胎早期发育的主要因素 | 第28-31页 |
4 本研究的目的和意义 | 第31-32页 |
材料与方法 | 第32-39页 |
1 实验主要仪器、设备及耗材 | 第32页 |
2 主要试剂 | 第32页 |
3 主要操作液 | 第32-34页 |
3.1 采卵液 | 第32-33页 |
3.2 卵母细胞培养液 | 第33页 |
3.3 精液处理液 | 第33页 |
3.4 受精卵培养液 | 第33页 |
3.5 染色液 | 第33-34页 |
4 材料来源 | 第34页 |
5 卵巢的采集及卵母细胞的收集和筛选 | 第34-35页 |
5.1 卵巢的采集 | 第34页 |
5.2 卵母细胞的收集 | 第34页 |
5.3 卵母细胞的筛 | 第34-35页 |
6 卵母细胞的体外成熟培养 | 第35页 |
7 精液的准备 | 第35-36页 |
7.1 精子获能前处理 | 第35页 |
7.2 精子的获能处理 | 第35-36页 |
8 成熟卵母细胞的体外受精和受精卵的体外发育 | 第36页 |
8.1 卵母细胞的体外受精 | 第36页 |
8.2 受精卵的体外发育 | 第36页 |
9 实验设计 | 第36-38页 |
9.1 肝素浓度对山羊精液品质的影响 | 第36-37页 |
9.2 季节对山羊卵母细胞采集、体外成熟和体外受精的影响 | 第37页 |
9.3 FSH、LH、E2 浓度对山羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎早期发育的影响 | 第37-38页 |
9.4 GDNF、LIF、SCF 浓度对山羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎早期发育的影响 | 第38页 |
9.5 细胞因子不同组合方式对山羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎早期发育的影响 | 第38页 |
10数据的统计处理 | 第38-39页 |
结果与分析 | 第39-44页 |
1 肝素浓度对山羊精液品质的影响 | 第39-40页 |
1.1 肝素浓度对精子活力的影响 | 第39页 |
1.2 肝素浓度对精子获能率的影响 | 第39-40页 |
1.3 肝素浓度对精子存活时间的影响 | 第40页 |
2 季节对山羊卵母细胞采集、体外成熟和体外受精的影响 | 第40-41页 |
2.1 季节对山羊卵母细胞采集和体外成熟的影响 | 第40-41页 |
2.2 季节对山羊卵母细胞体外受精的影响 | 第41页 |
3 FSH、LH、E_2 浓度对山羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎早期发育的影响 | 第41-42页 |
4 GDNF、LIF、SCF 浓度对山羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎早期发育的影响 | 第42-43页 |
5 细胞因子不同组合方式对山羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎早期发育的影响 | 第43-44页 |
讨论 | 第44-51页 |
1 肝素浓度对山羊精液品质的影响 | 第44页 |
2 季节对山羊卵母细胞采集、体外成熟和体外受精的影响 | 第44-45页 |
3 FSH、LH、E2 浓度对山羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎早期发育的影响 | 第45-47页 |
4 GDNF、LIF、SCF 浓度对山羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎早期发育的影响 | 第47-50页 |
5 细胞因子不同组合方式对山羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎早期发育的影响 | 第50-51页 |
结论 | 第51-52页 |
参考文献 | 第52-61页 |
附录 | 第61-62页 |
致谢 | 第62-63页 |
攻读学位期间发表的学术论文 | 第63-64页 |
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ABS2041269,这篇论文共64页
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