优化徐淮白山羊卵母细胞体外成熟及其受精卵体外培养体系的研究

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本文研究了肝素、采卵季节、激素以及不同细胞因子对徐淮白山羊卵母细胞体外成熟、体外受精及其受精卵体外培养的影响,主要结果如下:1.在BO液中添加浓度为10μg/mL的肝素诱导徐淮白山羊精子体外获能,对卵母细胞的体外受精最有利。2.与10~1月份相比,3~6月份的徐淮白山羊卵巢可采集到更多的可用卵母细胞。季节对徐淮白山羊卵母细胞的体外成熟有显著的影响(P<0.05),3~6月份卵母细胞的成熟率更高,而对卵母细胞的体外受精则无显著的影响(P>0.05)。3.在徐淮白山羊卵母细胞成熟培养液中添加激素能有效提高成熟率、2-cell率(P<0.01)和囊胚率(P<0.05),添加10单位/mL FSH、30单位/mL LH和lμg/mL E2时的效果最好。4.在徐淮白山羊成熟培养液和受精卵培养液中,试验组单独添加不同浓度的GDNF、LIF、SCF与对照组相比其成熟率、2-cell率、4~16-cell率和囊胚率差异极显著(P<0.01)。添加LIF组对山羊早期胚胎的发育都好于SCF组、GDNF组。但从整体看分别添加15 ng/mL的GDNF组、10 ng/mL的LIF组、10 ng/mL的SCF组的效果最好。5.三种细胞因子间存在协同作用,有效地促进了徐淮白山羊卵母细胞体外成熟和胚胎的早期发育,在成熟培养液和受精卵培养液中添加浓度为10 ng/mL LIF、10 ng/mL SCF、10 ng/mL GDNF组能有效提高卵母细胞的成熟率和早期胚胎的发育潜能。
缩略语表第5-7页
中文摘要第7-8页
英文摘要第8-9页
前言第10-32页
    1 哺乳动物卵母细胞体外成熟研究进展第10-18页
        1.1 卵母细胞的成熟过程第10-11页
        1.2 卵母细胞成熟的调节第11页
        1.3 卵母细胞体外成熟的研究现状第11-12页
        1.4 影响卵母细胞体外成熟的因素第12-18页
    2 哺乳动物体外受精的研究进展第18-27页
        2.1 体外受精的研究概况第19-23页
        2.2 影响体外受精效果的主要因素第23-27页
    3 哺乳动物胚胎体外培养的研究进展第27-31页
        3.1 胚胎体外培养的研究进展第27-28页
        3.2 影响胚胎早期发育的主要因素第28-31页
    4 本研究的目的和意义第31-32页
材料与方法第32-39页
    1 实验主要仪器、设备及耗材第32页
    2 主要试剂第32页
    3 主要操作液第32-34页
        3.1 采卵液第32-33页
        3.2 卵母细胞培养液第33页
        3.3 精液处理液第33页
        3.4 受精卵培养液第33页
        3.5 染色液第33-34页
    4 材料来源第34页
    5 卵巢的采集及卵母细胞的收集和筛选第34-35页
        5.1 卵巢的采集第34页
        5.2 卵母细胞的收集第34页
        5.3 卵母细胞的筛第34-35页
    6 卵母细胞的体外成熟培养第35页
    7 精液的准备第35-36页
        7.1 精子获能前处理第35页
        7.2 精子的获能处理第35-36页
    8 成熟卵母细胞的体外受精和受精卵的体外发育第36页
        8.1 卵母细胞的体外受精第36页
        8.2 受精卵的体外发育第36页
    9 实验设计第36-38页
        9.1 肝素浓度对山羊精液品质的影响第36-37页
        9.2 季节对山羊卵母细胞采集、体外成熟和体外受精的影响第37页
        9.3 FSH、LH、E2 浓度对山羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎早期发育的影响第37-38页
        9.4 GDNF、LIF、SCF 浓度对山羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎早期发育的影响第38页
        9.5 细胞因子不同组合方式对山羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎早期发育的影响第38页
    10数据的统计处理第38-39页
结果与分析第39-44页
    1 肝素浓度对山羊精液品质的影响第39-40页
        1.1 肝素浓度对精子活力的影响第39页
        1.2 肝素浓度对精子获能率的影响第39-40页
        1.3 肝素浓度对精子存活时间的影响第40页
    2 季节对山羊卵母细胞采集、体外成熟和体外受精的影响第40-41页
        2.1 季节对山羊卵母细胞采集和体外成熟的影响第40-41页
        2.2 季节对山羊卵母细胞体外受精的影响第41页
    3 FSH、LH、E_2 浓度对山羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎早期发育的影响第41-42页
    4 GDNF、LIF、SCF 浓度对山羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎早期发育的影响第42-43页
    5 细胞因子不同组合方式对山羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎早期发育的影响第43-44页
讨论第44-51页
    1 肝素浓度对山羊精液品质的影响第44页
    2 季节对山羊卵母细胞采集、体外成熟和体外受精的影响第44-45页
    3 FSH、LH、E2 浓度对山羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎早期发育的影响第45-47页
    4 GDNF、LIF、SCF 浓度对山羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎早期发育的影响第47-50页
    5 细胞因子不同组合方式对山羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎早期发育的影响第50-51页
结论第51-52页
参考文献第52-61页
附录第61-62页
致谢第62-63页
攻读学位期间发表的学术论文第63-64页
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论文编号ABS2041269,这篇论文共64页
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