肌红蛋白的基因表达对肉色的影响及肉色相关分子遗传标记研究

1 不同年龄、品种和性别对肉色相关候选基因表达的影响 本部分实验选用肉脂兼用型、肉质较好、但生长速度较慢的中国地方品种二花脸猪和瘦肉型、生长速度快，但肉质较差的国外引进品种大白猪做为实验动物。探讨肉色相关候选基因表达的发育性变化，并进行品种、性别间比较。 以相对定量RT-PCR法检测四个候选基因：肌红蛋白(Myoglobin，MB)、MEF2、Calcineurin、及NFATc1基因mRNA水平的发育性变化。结果表明： 肌红蛋白基因mRNA水平品种间比较，3日龄MB mRNA表达无论在大白公猪还是二花脸公猪均处在较低水平。之后，大白猪MB mRNA表达无显著变化；而二花脸在20日龄有显著的升高(P＜0.01)，之后维持此高水平表达。因此两品种3日龄时MBmRNA水平无显著差异，20～180日龄二花脸公猪显著高于大白公猪(P＜0.01或P＜0.05)。性别间，二花脸母猪背最长肌肌红蛋白mRNA表达的变化总体与公猪相似，但120～180日龄显著下降(P＜0.01)。 MEF2 mRNA的发育性变化与肌红蛋白mRNA有相似之处。MEF2mRNA水平品种间比较，二花脸猪出生后3～45日龄无显著差异，90日龄显著升高，之后略有下降；3日龄时，大白猪MEF2基因表达水平非常低，且整个发育阶段无显著变化。因而两品种在90日龄前无显著差异，90～180日龄二花脸猪显著高于大白猪(P＜0.01)。性别间，二花脸公、母猪3～120日龄MEF2mRNA表达均处在上升阶段，各日龄间无显著差异。180日龄时，二花脸母猪MEF2 mRNA水平显著下降(P＜0.01)。 Calcineurin mRNA的品种间差异仅表现在20日龄时二花脸猪显著高于大白猪，其余发育阶段无显著差异。两品种在整个发育阶段均无显著变化，性别间在整个发育阶段亦无显著差异。 NFATc1mRNA水平在大白公猪和二花脸公猪出生后3日龄时均较低，20日龄均显著升高(P＜0.01)，之后大白公猪呈上升趋势而二花脸公猪則呈下降趋势，造成在120和180日龄，大白公猪显著高于二花脸公猪(P＜0.01)。但两者各自在20日龄以肌红蛋白基因表达对肉色的影响及肉色相关分子标记研究后的发育阶段均无显著变化。性别间，二花脸公、母猪NF戌fc 1 mRNA水平均存在一个先升后降的趋势，但两者间在各个日龄均无显著差异. 因而品种间比较，MB、MEFZ及Calcineurin三个基因表达在二花脸公猪显著高于大白猪;MB和MEFZmRNA在品种和性别间，表达趋势有相似之处;NFARI基因与其他基因不同，在整个发育阶段，品种间，大白猪显著高于二花脸猪。2苏太猪肉色个体差异的分子机理 本部分首先以PCR一RFLP法对苏太猪氟烷基因型进行检测，结果表明所选苏太猪氟烷基因均呈NN型。 本部分涉及的参数包括:肉色表观性状(主观肉色评分以及色差计测定的色度参数包括L、a、b、c、Hue值)、肉色相关其他肉质性状参数(pH和失水率)、肌红蛋白浓度、肌红蛋白mRNA及其余候选基因的mRNA水平。 经相关性分析，结果显示:在色度参数内部，a*值与b*值呈极显著高度正相关(拼0.745，P<O.ol);主观肉色评分与Hunte;L*值之间呈负相关(:二一0.235，P<0 .05);而与a*值间呈正相关(二0.459，P<0.01):a*值与MB浓度(r=0.406，P<0.01)、与MBm州A(二0.379，P<0.01)lb1均呈显著相关:pHZ;与MB浓度(r=o.ZsZ，P<0.01)、与MBm胭A(r=0.383，P<0.01)均呈极显著中度正相关;而失水率与pHZ;恰巧相反，与MB浓度(二一0.244，p<0.05)及MB mRNA(r=一0.504，p<0.01)均呈中度负相关‘以上结果表明主观肉色评分、色差仪测定色度参数、肌红蛋白浓度及mRNA水平检测这三个层面对肉色评定结果的一致性。 MBInRNA与肉色评分(r=o.426，P二0.002)、与色度参数，其中与a*值(二0.379，P=0 .006)、与C值(下0.291，P=0.036)、与Hue值(下一0.360，P==0;009)、与MB浓度(。0.364，P<0 .01)间均呈显著相关性，提示MBmRNA具有作为动物肉色性状早期选育指标之一的可行性。 除MBmRNA外，NFA’fc 1 mRNA与肉色评分、色度参数、MB浓度、MB mRNA及其余候选基因水平间，呈广泛显著相关性，提示NFAI’c1可能在苏太猪发育后期对于肉色起重要作用，具体机制有待进一步研究. 可见，肌红蛋白mRNA、NFA几1 mRNA均与肌红蛋白浓度及肉色表观性状显著相关。3肉色相关分子遗传标记研究中文摘要 采用RT‘PCR一SSCP的方法，对与肌红蛋白浓度及肉色表观性状显著相关的MB基因与NFAYcl基因进行多态性分析，结果NF戌Ycl基因未检测到多态性;肌红蛋白基因检测到多态性，但三种基因型间肌红蛋白浓度无显著差异。关键词:猪;肉色;肌红蛋白;肌纤维类型;候选基因七