| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 插图和附表清单 | 第13页 |
| 缩略语表 | 第13-15页 |
| 1 引言 | 第15-32页 |
| 1.1 全球转基因作物发展概况 | 第15-18页 |
| 1.1.1 全球转基因作物的种类、种植面积和分布 | 第15页 |
| 1.1.2 转基因大豆概况 | 第15-18页 |
| 1.2 转基因作物的安全性评价和标识制度 | 第18-21页 |
| 1.2.1 转基因作物的安全性问题 | 第18-20页 |
| 1.2.2 转基因作物的标识制度 | 第20-21页 |
| 1.3 转基因产品检测技术研究概况 | 第21-29页 |
| 1.3.1 核酸检测方法 | 第21-27页 |
| 1.3.2 蛋白检测方法 | 第27-28页 |
| 1.3.3 其他检测方法 | 第28-29页 |
| 1.4 不同加工方式对转基因饲料原料的影响 | 第29-30页 |
| 1.5 研究内容和技术路线 | 第30-32页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第30-31页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第31-32页 |
| 2 饲料及原料中转基因大豆的核酸检测 | 第32-54页 |
| 2.1 材料、试剂和主要仪器 | 第32-33页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第32页 |
| 2.1.2 主要溶液与试剂 | 第32-33页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第33页 |
| 2.2 试验方法 | 第33-40页 |
| 2.2.1 饲料及原料中转基因大豆DNA 的提取 | 第33-35页 |
| 2.2.2 定性 PCR 反应体系和反应条件的建立 | 第35-37页 |
| 2.2.3 LAMP 技术反应体系和反应条件的建立 | 第37-38页 |
| 2.2.4 定量 PCR 反应体系和反应条件的建立 | 第38-40页 |
| 2.3 结果与分析 | 第40-51页 |
| 2.3.1 不同 DNA 提取方法比较 | 第40-41页 |
| 2.3.2 物种特异性基因的PCR 扩增 | 第41页 |
| 2.3.3 品系特异性基因的PCR 扩增 | 第41-42页 |
| 2.3.4 三重 PCR 扩增 | 第42-45页 |
| 2.3.5 LAMP 扩增 | 第45-47页 |
| 2.3.6 TaqMan 探针实时荧光 PCR 定量检测 | 第47-51页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第51-54页 |
| 3 转基因大豆 CP4 - EPSPS 基因的克隆和表达 | 第54-69页 |
| 3.1 材料、试剂和主要仪器 | 第54-56页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第54页 |
| 3.1.2 菌株与载体 | 第54页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第54页 |
| 3.1.4 相关溶液配制 | 第54-56页 |
| 3.1.5 主要仪器设备 | 第56页 |
| 3.2 转基因大豆 CP4 - EPSPS 基因的克隆 | 第56-59页 |
| 3.2.1 转基因大豆基因组DNA 的提取 | 第56页 |
| 3.2.2 CP4 - EPSPS 基因的 PCR 扩增 | 第56-57页 |
| 3.2.3 CP4 - EPSPS 基因的克隆 | 第57-59页 |
| 3.3 转基因大豆 CP4 - EPSPS 基因在大肠杆菌中的重组表达 | 第59-62页 |
| 3.3.1 表达载体pET28a (+) / pET32a (+)的制备 | 第59页 |
| 3.3.2 目的基因与载体的连接 | 第59页 |
| 3.3.3 重组质粒pET28a (+) - CP4 和pET32a (+) - CP4 双酶切鉴定 | 第59页 |
| 3.3.4 重组质粒pET28a (+) - CP4 和pET32a (+) - CP4 的诱导表达 | 第59-61页 |
| 3.3.5 SDS - PAGE 分析 | 第61页 |
| 3.3.6 重组蛋白的纯化 | 第61-62页 |
| 3.4 结果与分析 | 第62-67页 |
| 3.4.1 CP4 - EPSPS 基因的 PCR 扩增 | 第62页 |
| 3.4.2 重组质粒pEASY - CP4 的双酶切鉴定 | 第62-63页 |
| 3.4.3 转基因大豆 CP4 - EPSPS 基因在大肠杆菌中的重组表达 | 第63-67页 |
| 3.5 小结与讨论 | 第67-69页 |
| 4 饲料及原料中转基因大豆的蛋白检测 | 第69-76页 |
| 4.1 材料、试剂和主要仪器 | 第69页 |
| 4.1.1 材料与主要仪器 | 第69页 |
| 4.1.2 主要溶液与试剂 | 第69页 |
| 4.2 试验方法 | 第69-71页 |
| 4.2.1 蛋白的提取 | 第69-70页 |
| 4.2.2 Western Blot 检测样品CP4-EPSPS 蛋白 | 第70页 |
| 4.2.3 间接 ELISA 方法检测样品CP4-EPSPS 蛋白 | 第70页 |
| 4.2.4 间接 ELISA 标准曲线的绘制 | 第70-71页 |
| 4.2.5 饲料及原料中CP4 - EPSPS 蛋白质含量的测定 | 第71页 |
| 4.3 结果与分析 | 第71-74页 |
| 4.3.1 Western Blot 检测灵敏度分析 | 第71页 |
| 4.3.2 Western Blot 检测饲料及原料 | 第71-72页 |
| 4.3.3 间接 ELISA 重复性验证 | 第72页 |
| 4.3.4 间接 ELISA 标准曲线的绘制 | 第72-73页 |
| 4.3.5 间接 ELISA 法定量检测饲料及原料 | 第73-74页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第74-76页 |
| 5 不同加工方式对转基因豆粕核酸和蛋白质的影响 | 第76-94页 |
| 5.1 材料、试剂和主要仪器 | 第76页 |
| 5.1.1 材料与主要仪器 | 第76页 |
| 5.1.2 主要溶液与试剂 | 第76页 |
| 5.2 试验方法 | 第76-79页 |
| 5.2.1 干热处理试验设计 | 第76页 |
| 5.2.2 湿热处理试验设计 | 第76-77页 |
| 5.2.3 挤压膨化试验设计 | 第77页 |
| 5.2.4 基因组 DNA 和总蛋白质的提取 | 第77页 |
| 5.2.5 引物序列 | 第77页 |
| 5.2.6 PCR 反应体系及条件 | 第77-79页 |
| 5.2.7 Western Blot 检测膨化豆粕CP4 - EPSPS 蛋白 | 第79页 |
| 5.2.8 间接 ELISA 方法检测膨化豆粕CP4 - EPSPS 蛋白 | 第79页 |
| 5.2.9 间接 ELISA 标准曲线的绘制 | 第79页 |
| 5.2.10 膨化豆粕中 CP4 - EPSPS 蛋白质含量的测定 | 第79页 |
| 5.3 结果与分析 | 第79-92页 |
| 5.3.1 引物特异性验证 | 第79-82页 |
| 5.3.2 不同加工方式对内源基因Lectin 的影响 | 第82-85页 |
| 5.3.3 不同加工方式对外源基因CP4 - EPSPS 的影响 | 第85-86页 |
| 5.3.4 挤压膨化对豆粕中内外源基因降解程度的影响 | 第86-89页 |
| 5.3.5 挤压膨化对豆粕CP4 - EPSPS 蛋白的影响 | 第89-90页 |
| 5.3.6 间接 ELISA 法定量检测膨化豆粕 | 第90-92页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第92-94页 |
| 6 总结与建议 | 第94-96页 |
| 6.1 总体结论 | 第94-95页 |
| 6.2 主要创新 | 第95页 |
| 6.3 建议 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-108页 |
| 作者简介 | 第108页 |
