非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是临床上最常见的慢性肝脏疾病,其主要特点是肝脏组织脂肪的沉积,这与肝脏脂肪的摄取和分解失衡有关。随着我国社会经济的发展、生活习惯和饮食结构的改变,NAFLD的发病率逐年增加。非酒精性脂肪肝炎(non-alcoholic steatohepatit is,NASH)是非酒精性脂肪肝病的一种病理类型,是一种进展性疾病。据统计,约30%~40%的N ASH合并肝脏纤维化,10%~15%N ASH患者可发展为肝硬化,而约9~26%的NASH合并肝硬化患者在随访的4~10年内死亡。目前,尚未有充足循证医学证据的药物治疗手段。因此,尽早开展对NASH的防治工作,是改善患者预后的重要手段,对降低肝硬化发生率,提高人们的生活质量,具有重要的意义。大黄素(emodin)是某些中药(如大黄、何首乌等)的有效成分,属于蒽醌类物质。研究表明大黄素具有广泛的药理作用,包括抗炎、抗菌、利尿、降血压、抗肿瘤等。关于NASH的最新实验数据大部分来源于两种动物模型,一是高脂饲料喂养的动物模型,二是蛋氨酸胆碱缺乏(methionine-choline deficient,MC D)饮食诱导的非酒精性脂肪肝炎模型。我们前期研究发现,大黄素对高脂饲料诱导的NASH有显著改善作用。但是,大黄素对于MCD饮食诱导的NASH是否具有类似的保护作用,至今未见报道。目的研究大黄素对蛋氨酸-胆碱缺乏饲料诱导的小鼠非酒精性脂肪肝炎的影响。方法实验一:MCD饮食诱导的非酒精性脂肪肝炎模型的建立1、20只C 57BL/6J小鼠适应性喂养1周后随机分为两组,分别为添加蛋氨酸-胆碱饲料组(MCS)和MCD饲料组(MCD);2、动态观察小鼠的一般情况,每周称取一次体重;3、喂养4周后处死小鼠,记录体重、肝重,取肝脏组织和血液标本;4、HE染色观察肝脏病理改变;5、全自动生化分析仪检测血清谷氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ATL)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase,AST)水平。实验二:大黄素对MCD饮食诱导的非酒精性脂肪肝炎的作用1、38只C 57BL/6J小鼠适应性喂养1周后随机分为3组,分别为添加蛋氨酸-胆碱饲料联合DMSO注射组(MCS)、MCD饲料联合DMSO注射组(MCD)、MC D饲料联合大黄素注射组(MC D-emodin);2、三组小鼠喂养相应饲料,10d后,从腹腔分别注射DMSO或大黄素(40 mg/kg),连续注射18d;3、观察小鼠一般情况,每周称取一次体重;4、4周后处死小鼠,记录体重、肝重、脾重;取肝脏、脾脏组织和血液标本;5、HE染色观察小鼠肝脏病理改变;6、全自动生化分析仪检测血清谷氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ATL)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase,AST)、甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(serum total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)、低密度脂蛋白(low densit y lipoprotein,LDL)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和葡萄糖(glucose,GLU)水平;7、实时定量PC R技术检测肝脏白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。结果实验一经MCD饲料喂养的小鼠毛发粗糙,精神萎靡,体重与肝重较MCS组显著下降(p<0.05);HE染色显示,与MCS组相比,MCD组引起明显的脂肪变性和炎性细胞浸润;血生化结果显示,与MCS组相比,MCD组血清ALT和AST水平显著升高(p<0.05)。实验二1、MC D组与MC D-emodin组小鼠外观、体重、肝重、脾重无明显区别;2、HE染色显示,与MC S组相比,MC D组引起明显的脂肪变性和炎性细胞的浸润,且注射大黄素后脂肪变性及炎性细胞浸润明显增加;3、与MCD组相比,注射大黄素后,血清ALT、AST水平显著升高(p<0.05);4、与MCD组相比,MCD-emodin组小鼠肝脏IL-1β和IL-6的m RN A水平明显上升(p<0.05)。结论本课题以中药提取物大黄素为切入点,研究其在MCD饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪肝炎中的作用及机制。本实验通过MCD饮食成功建立了小鼠非酒精性脂肪肝炎模型,观察到小鼠出现明显的脂肪浸润和肝功能损伤,经大黄素干预后小鼠脂肪变性加重,血清ALT、AST水平明显增加,肝脏炎性因子表达水平显著升高。本实验结果表明,大黄素加重MCD饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪肝炎。
