柑橘碎叶病毒侵染性克隆构建及其诱导的基因沉默（VIGS）体系建立
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论文详情
| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-40页 |
| 1.1 柑橘碎叶病毒(CITRUS TATTER LEAF VIRUS,CTLV)研究进展 | 第14-22页 |
| 1.1.1 CTLV的发生与为害 | 第14-15页 |
| 1.1.2 CTLV的侵染症状 | 第15页 |
| 1.1.3 CTLV的寄主范围及传播途径 | 第15-16页 |
| 1.1.4 CTLV的分类地位 | 第16页 |
| 1.1.5 CTLV的分子生物学特性 | 第16-17页 |
| 1.1.6 CTLV的检测方法 | 第17-19页 |
| 1.1.7 CTLV的多态性 | 第19-21页 |
| 1.1.8 CTLV的防治 | 第21-22页 |
| 1.2 植物RNA病毒侵染性克隆研究进展 | 第22-28页 |
| 1.2.1 病毒基因组的cDNA合成 | 第22页 |
| 1.2.2 病毒侵染性克隆的构建 | 第22-24页 |
| 1.2.3 影响病毒全基因组cDNA侵染活性的因素 | 第24-28页 |
| 1.2.4 植物病毒侵染性克隆的应用 | 第28页 |
| 1.3 病毒诱导的基因沉默(VIRUS-INDUCED GENE SILENCING,VIGS)研究进展 | 第28-40页 |
| 1.3.1 VIGS的机制 | 第29-32页 |
| 1.3.2 VIGS的技术发展 | 第32-35页 |
| 1.3.3 影响VIGS效率的因素 | 第35-37页 |
| 1.3.4 VIGS的优势和局限性 | 第37-38页 |
| 1.3.5 VIGS的应用 | 第38-40页 |
| 第二章 引言 | 第40-44页 |
| 2.1 研究背景 | 第40-42页 |
| 2.2 研究目的及意义 | 第42页 |
| 2.3 研究内容 | 第42-44页 |
| 第三章 柑橘碎叶病毒多态性分析 | 第44-60页 |
| 3.1 实验材料 | 第44-45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-48页 |
| 3.3 结果与分析 | 第48-56页 |
| 3.3.1 一步法RT-PCR | 第48-49页 |
| 3.3.2 巢式RT-PCR | 第49-51页 |
| 3.3.3 指示植物鉴定 | 第51-52页 |
| 3.3.4 3'端序列分析 | 第52-53页 |
| 3.3.5 限制性片段长度多态性(RFLP)分析 | 第53-56页 |
| 3.4 讨论 | 第56-60页 |
| 第四章 CTLV全长CDNA克隆及序列分析 | 第60-80页 |
| 4.1 试验材料 | 第60-61页 |
| 4.2 试验方法 | 第61-66页 |
| 4.3 结果与分析 | 第66-77页 |
| 4.3.1 总核酸提取 | 第66页 |
| 4.3.2 RACE(Rapid amplification of cDNA ends) | 第66-68页 |
| 4.3.3 CTLV全基因组的RT-PCR | 第68-70页 |
| 4.3.4 CTLV全基因组cDNA的克隆及鉴定 | 第70页 |
| 4.3.5 CTLV全基因组测序及序列拼接 | 第70-72页 |
| 4.3.6 CTLV全基因组序列分析 | 第72-73页 |
| 4.3.7 CTLV基因组ORF及类亚基因组启动子分析 | 第73-75页 |
| 4.3.8 CTLV的二级结构 | 第75-77页 |
| 4.4 讨论 | 第77-80页 |
| 第五章 CTLV侵染性克隆构建 | 第80-96页 |
| 5.1 实验材料 | 第80-81页 |
| 5.2 试验方法 | 第81-85页 |
| 5.3 试验结果 | 第85-93页 |
| 5.3.1 CTLV全长cDNA的侵染性鉴定 | 第85-87页 |
| 5.3.2 双元表达载体pCSSN的构建 | 第87-88页 |
| 5.3.3 pCSSN-XHC的构建 | 第88-90页 |
| 5.3.4 pCSSN-MTH的构建 | 第90-91页 |
| 5.3.5 农杆菌介导的pCSSN-XHC及pCSSN-MTH侵染性鉴定 | 第91-93页 |
| 5.4 讨论 | 第93-96页 |
| 第六章 CTLV诱导的VIGS体系建立 | 第96-106页 |
| 6.1 实验材料 | 第96-97页 |
| 6.2 试验方法 | 第97-99页 |
| 6.3 试验结果 | 第99-104页 |
| 6.3.1 VIGS载体pCTLV-00的构建 | 第99-100页 |
| 6.3.2 重组载体pCTLV-PDS402R的构建 | 第100-101页 |
| 6.3.3 pCTLV-PDS402R接种及RT-PCR检测 | 第101页 |
| 6.3.4 pCTLV-PDS402R诱导的基因沉默效应分析 | 第101-103页 |
| 6.3.5 VIGS体系优化 | 第103-104页 |
| 6.4 讨论 | 第104-106页 |
| 第七章 结论 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-126页 |
| 附录Ⅰ pCTLVl全序列 | 第126-132页 |
| 附录Ⅱ 英文缩略表 | 第132-133页 |
| 附录Ⅲ 论文涉及的病毒缩写及中英文对照表 | 第133-134页 |
| 攻读博士学位期间的科研项目及成果论文 | 第134-136页 |
| 致谢 | 第136页 |
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